バクテリオファージPHIの感染性ヌクレオカプシドのin vitroアセンブリ6：組換え二本鎖RNAウイルスの形成

in vitroで感染性バクテリオファージPhi 6ヌクレオカプシドを組み立てるためのシステムが説明されています。大腸菌のゲノムセグメントlのcDNAコピーによってコードされたプロカプシドを使用して、ウイルスRNAセグメントをパッケージ化および複製しました。得られた充填された粒子は、精製されたヌクレオカプシドシェルタンパク質P8とのインキュベーション後に宿主細胞の球状形成に感染することができることが示されました。感染した球状形成は、感染性のビリオンをもたらしました。この方法により、修正されたcDNA由来RNAセグメントがビリオンに挿入されました。結果として生じる感染性ビリオンには、修正されたcDNAと同じ4塩基対削除が含まれていました。これらの発見は、cDNA由来のプロカプシドがRNAを適切に包装および複製する能力があることを示すことにより、Phi 6ゲノムを再現する「機械」であるという主張を支持しています。

A system is described for assembling infectious bacteriophage phi 6 nucleocapsids in vitro. Procapsids encoded by cDNA copies of genomic segment L in Escherichia coli were used to package and replicate viral RNA segments. The resulting filled particles were shown to be capable of infecting host cell spheroplasts after incubation with purified nucleocapsid shell protein P8. The infected spheroplasts yielded infectious virions. A modified cDNA-derived RNA segment was inserted into virions by this method. The resulting infectious virions contained the same 4-base-pair deletion as the modified cDNA. These findings support the contention that the preformed procapsids are the "machine" that replicates the phi 6 genome, by showing that the cDNA-derived procapsids are competent to package and replicate RNA properly.