法医学DNA分析のためのABOタイピングと多重STRテストの統合システム

単一の反応におけるABOおよびSTRジェノタイピングの新しい増幅システムが正常に開発されました。一度に生物学的サンプルから2種類の情報を取得できます。1つは、容疑者のスクリーニングのためにタイピングするABO血液層の古典的な情報であり、もう1つは個別の識別のためのSTR情報です。このシステムにより、15の常染色体STR遺伝子座（すべてのCODIS STR遺伝子座とPENTA DおよびPENTA Eを含む）、6つのABO遺伝子型（O/O、B/B、A/A、A/O、A/O/を同時に検出できます。b、およびb/o）および性別を決定する遺伝子座アメロゲニン。入門書は、アンプリコンが4色の蛍光設計内で75bpから500bpの範囲で分布しているように設計されており、4番目の染料を内部サイズの標準にします。30サイクルで、このマルチプレックス範囲の最適量のDNAテンプレートが250pgから2ngまで、最低検出しきい値が125pg（ABO遺伝子座の場合は63pg）であることが結果が示されました。最適な検出範囲外のDNAテンプレートの場合、サイクル数を調整して堅牢なプロファイルを取得できます。混合研究により、マイナーアレルの83％以上が1：9比で検出されたことが示されました。4ngの劣化DNAをDNase Iで消化し、1NG未分解DNAを40μmヘマチンに加えた場合、完全なプロファイルがまだ観察されました。ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）ベースのプライマー、マグネシウム、TAQポリメラーゼ、および体積、サイクル数、アニーリング温度を含む条件を調べて最適化しました。さらに、このシステムは、364個の血液ステインサンプルと32個の一般的なケースワークサンプルによって検証されました。DNA分析方法（SWGDAM）ガイドラインに関する中国の国家基準と科学的ワーキンググループによれば、私たちのシステムは優れた検出性能を実証し、潜在的な適用を伴う法医学DNAタイピングに理想的なツールです。

A new amplification system for ABO and STR genotyping in a single reaction has been successfully developed. Two types of information can be obtained from a biological sample at one time. One is the classical information of ABO blood group typing for screening suspects and the other is STR information for individual identification. The system allows for the simultaneous detection of 15 autosomal STR loci (containing all CODIS STR loci as well as Penta D and Penta E), six ABO genotypes (O/O, B/B, A/A, A/O, A/B, and B/O) and the gender-determining locus Amelogenin. Primers are designed so that the amplicons are distributed ranging from 75bp to 500bp within a four-dye fluorescent design, leaving a fourth dye for the internal size standard. With 30 cycles, the results showed that the optimal amount of DNA template for this multiplex ranges from 250pg to 2ng and the lowest detection threshold is 125pg (as low as 63pg for ABO loci). For the DNA template outside the optimal detection range, we could adjust the number of cycles to obtain the robust profiles. Mixture studies showed that over 83% of minor alleles were detected at 1:9 ratios. The full profiles were still observed when 4ng of degraded DNA was digested by DNase I and 1ng undegraded DNA was added to 40μM haematin. Polymerase chain reaction (PCR)-based conditions including the concentrations of primers, magnesium and the Taq polymerase as well as volume, cycle numbers and annealing temperature were examined and optimised. In addition, the system was validated by 364 bloodstain samples and 32 common casework samples. According to the Chinese National Standards and Scientific Working Group on DNA Analysis Methods (SWGDAM) guidelines, our system demonstrates good detection performance and is an ideal tool for forensic DNA typing with potential application.