不純物還元のためのカプリル酸沈殿法：モノクローナル抗体精製のための従来のクロマトグラフィーの代替

カプリル酸ベースの不純物の沈殿の使用を、（1）モノクローナル抗体精製に一般的に使用されるクロマトグラフィー技術の研磨および（2）バイオリアクターを採取する前の不純物削減ステップとしての代替方法として報告します。この不純物還元方法は、タンパク質A精製抗体と細胞培養液でテストされました。第一に、プロテインAプールの宿主細胞タンパク質の沈殿と高分子量凝集に影響を与える動作パラメーターを調査しました。研磨段階として使用する場合、精製と収量に影響を与える主要な要因はpHであると判断されました。カプリル酸沈殿は、宿主細胞タンパク質と凝集レベルの低下におけるIEXクロマトグラフィーの研磨に匹敵しました。ウイルス還元研究では、タンパク質A精製抗体のカプリル酸沈殿中のモデルレトロウイルスの完全なクリアランスが示されました。カプリル酸を介した細胞培養における不純物の沈殿は、不純物のクリアランスが一般にpHおよびカプリル酸濃度に鈍感であるのに対し、収量はカプリル酸濃度の関数であることを示しました。タンパク質Aカプリル酸沈殿した細胞培養液の精製により、宿主細胞タンパク質のレベルが低下し、高分子量凝集が低い濁る製品プールが少なくなりました。この研究の結果は、カプリル酸の沈殿物が、既存のタンクとプロセスフローを利用するため、最小限のコストで生産施設に組み込むことができる効果的な精製方法であることを示しています。クロマトグラフィーの研磨ステップを介したフローを排除すると、高力価のプロセスのプロセスタンクボリューム制約を回避することにより、プロセス強化を提供できます。

We report the use of caprylic acid based impurity precipitation as (1) an alternative method to polishing chromatography techniques commonly used for monoclonal antibody purification and (2) an impurity reduction step prior to harvesting the bioreactor. This impurity reduction method was tested with protein A purified antibodies and with cell culture fluid. First, the operational parameters influencing precipitation of host cell proteins and high molecular weight aggregate in protein A pools were investigated. When used as a polishing step, the primary factor affecting purification and yield was determined to be pH. Caprylic acid precipitation was comparable to polishing IEX chromatography in reducing host cell protein and aggregate levels. A virus reduction study showed complete clearance of a model retrovirus during caprylic acid precipitation of protein A purified antibody. Caprylic acid mediated impurity precipitation in cell culture showed that the impurity clearance was generally insensitive to pH and caprylic acid concentration whereas yield was a function of caprylic acid concentration. Protein A purification of caprylic acid precipitated cell culture fluid generated less turbid product pool with reduced levels of host cell proteins and high molecular weight aggregate. The results of this study show caprylic acid precipitation to be an effective purification method that can be incorporated into a production facility with minimal cost as it utilizes existing tanks and process flow. Eliminating flow through chromatography polishing step can provide process intensification by avoiding the process tank volume constraints for high titer processes.