リンチフィリンは、培養ラットニューロンをメタンフェタミン細胞毒性から保護します

リンチフィリン（Rhy）は、伝統的な漢方薬における中枢神経系の病気の治療に使用されているUncaria属の種から分離された活性成分です。カルシウムチャネルブロッカーとして機能することに加えて、Rhyはグルタミン酸誘発性ニューロン死から保護できることも報告されました。したがって、私たちは、rhyがメタンフェタミン（MA）に対して神経保護活性を持っている可能性があると仮定します。一次ニューロンは、新生児ラットの大脳皮質から直接培養され、本研究ではin vitroモデルとして作用しました。MAの神経毒性とrhyの保護効果は、MTTアッセイによって評価されました。Fluo-3/AMトレース法により、個々の新皮質ニューロンで、細胞内遊離カルシウム濃度（[Ca（2+）]（i））に及ぼすMa、rhyまたはそれらの組み合わせの効果が決定されました。MTTアッセイは、MAが神経培養に用量依存性神経毒性を持っていることを実証しました。MAにさらされる前にrhyを添加すると、ニューロンの死が防止されました。FLUO-3/AMプローブを用いた時間経過研究により、RhyはMAへの暴露によって上昇するニューロン[Ca（2+）]（i）を有意に減少させることが示されました。我々の結果は、RhyがMA暴露からニューロン培養を保護し、MAチャレンジによって引き起こされる細胞内カルシウム過負荷を速やかに減衰させることを示唆しました。これは、in vitroでの培養ニューロンのMA障害に対するrhyの抑制効果を示す最初の報告です。

Rhynchophylline (Rhy) is an active component isolated from species of the genus Uncaria which has been used for the treatment of ailments to the central nervous system in traditional Chinese medicine. Besides acting as a calcium channel blocker, Rhy was also reported to be able to protect against glutamate-induced neuronal death. We thus hypothesize that Rhy may have neuroprotective activity against methamphetamine (MA). The primary neurons were cultured directly from the cerebral cortex of neonatal rats, acting as in vitro model in the present study. The neurotoxicity of MA and the protective effect of Rhy were evaluated by MTT assay. The effects of MA, Rhy or their combination on intracellular free calcium concentration ([Ca(2+)](i)) were determined in individual neocortical neurons by the Fluo-3/AM tracing method. The MTT assay demonstrated that MA has a dose-dependent neurotoxicity in neuronal cultures. The addition of Rhy prior to the exposure to MA prevented neuronal death. Time course studies with the Fluo-3/AM probe showed that Rhy significantly decreased neuronal [Ca(2+)](i) which was elevated by the exposure to MA. Our results suggested that Rhy can protect the neuronal cultures against MA exposure and promptly attenuate intracellular calcium overload triggered by MA challenge. This is the first report demonstrating an inhibitory effect of Rhy against MA impairment in cultured neurons in vitro.