バクテリオファージT7 DNAパッケージI T7複製起源を含むプラスミドとT7連結接合部は、ファージ感染中に透過粒子にパッケージ化されています

バクテリオファージT7 DNAは、その端に160の塩基対直接繰り返し（末端冗長性）を備えた線形二重分子です。複製中に、大規模なDNA連結因子が形成されます。これは、末端冗長性での組換えにより、T7ゲノムリンクヘッドに尾に結合したマルチマーです。この組換えに起因するシーケンスを定義します。これは、ConcatemerジャンクションとしてT7 DNAの左端に結合された成熟した右端です。T7コンカテマーのファージ粒子への加工とパッケージングを研究するために、T7コンダクマー接合部をプラスミドベクターにクローニングしました。このプラスミドは、T7感染中にトランスデューブ粒子にパッケージ化された効率的に（少なくとも15粒子/感染した細胞）。これらの導入粒子は、沈降によってT7ファージからCSCLの平衡まで分離できます。パッケージ化されたプラスミドDNAは、予想されるT7 DNA配列に端がある約40 x 10（3）の塩基対の線形連結剤です。したがって、プラスミド上のT7連結接合シーケンスは、ファージシステムによる処理と包装のために認識されます。効率的なプラスミド包装に必要なT7ゲノムの右端近くにT7 DNA複製起源を特定しました。T7 RNAポリメラーゼプロモーターに関連する起源は、T7感染中にプラスミドDNAの増幅を引き起こします。増幅されたプラスミドDNA堆積物は非常に迅速に、大きな連結剤を含んでおり、包装反応の良い基質であると予想されます。PBR322でクローン化されると、T7 DNAの成熟した右端のみを含むシーケンスでは、効率的なパッケージに十分です。このシーケンスには、成熟したT7の右端が形成されるサイトの右側にDNAが含まれていないため、このDNAに右端が形成されないことが予想されました。実際、このプラスミドでは、右端は通常のT7配列で形成されませんが、代わりにベクトル内で形成されます。どうやら、T7パッケージングシステムは、PBR322 DNAのサイトを認識して、パッケージングの終わりを生成することもできます。このサイトは、パッケージ化されたDNAの量にかなりのばらつきがある可能性があるため、「ヘッドフル」メカニズムのみによって認識されません（32 x 10（3）から42 x 10（3）ベースペア）。さらに、ベクターDNAからのこの領域の削除は、プラスミドの包装を防ぎます。ベクターDNAで形成される端は、やや不均一です。端の約3分の1は一意の部位（PBR322のヌクレオチド1712）にあり、その後、シーケンス5'-ATCTGT-3 'が続きます。このシーケンスは、通常のT7右端を生成するために、T7 DNAコンカテマーで作成されたカットに隣接して見られます。

Bacteriophage T7 DNA is a linear duplex molecule with a 160 base-pair direct repeat (terminal redundancy) at its ends. During replication, large DNA concatemers are formed, which are multimers of the T7 genome linked head to tail through recombination at the terminal redundancy. We define the sequence that results from this recombination, a mature right end joined to the left end of T7 DNA, as the concatemer junction. To study the processing and packaging of T7 concatemers into phage particles, we have cloned the T7 concatemer junction into a plasmid vector. This plasmid is efficiently (at least 15 particles/infected cell) packaged into transducing particles during a T7 infection. These transducing particles can be separated from T7 phage by sedimentation to equilibrium in CsCl. The packaged plasmid DNA is a linear concatemer of about 40 x 10(3) base-pairs with ends at the expected T7 DNA sequences. Thus, the T7 concatemer junction sequence on the plasmid is recognized for processing and packaging by the phage system. We have identified a T7 DNA replication origin near the right end of the T7 genome that is necessary for efficient plasmid packaging. The origin, which is associated with a T7 RNA polymerase promoter, causes amplification of the plasmid DNA during T7 infection. The amplified plasmid DNA sediments very rapidly and contains large concatemers, which are expected to be good substrates for the packaging reaction. When cloned in pBR322, a sequence containing only the mature right end of T7 DNA is sufficient for efficient packaging. Since this sequence does not contain DNA to the right of the site where a mature T7 right end is formed, it was expected that right ends would not form on this DNA. In fact, with this plasmid the right end does not form at the normal T7 sequence but is instead formed within the vector. Apparently, the T7 packaging system can also recognize a site in pBR322 DNA to produce an end for packaging. This site is not recognized solely by a "headful" mechanism, since there can be considerable variation in the amount of DNA packaged (32 x 10(3) to 42 x 10(3) base-pairs). Furthermore, deletion of this region from the vector DNA prevents packaging of the plasmid. The end that is formed in vector DNA is somewhat heterogeneous. About one-third of the ends are at a unique site (nucleotide 1712 of pBR322), which is followed by the sequence 5'-ATCTGT-3'. This sequence is also found adjacent to the cut made in a T7 DNA concatemer to produce a normal T7 right end.