大腸菌の日常的な形質転換の最適化プラスミドDNA

3つの塩化カルシウム法によって調製されたDH1 Escherichia coliの日常的な日常的な変換の資源と変換効率を最適化する方法を調査し、ポリエチレングリコールおよびハナハン法と比較しました。熱ショックステップの利点、抗生物質耐性の発現、対数相細菌の使用、および細菌の長期貯蔵の発現を可能にするための事前測定ステップを調査しました。CACL2法によって調製された細菌は、4 x 10（6）形質転換体/マイクログラムのプラスミドDNA以上の効率を一貫して与え、全体的に最も労働および資源効率の良い方法でした。対数相バクテリア、熱ショック、インキュベーションステップの使用は、すべての方法で新たに調製した細菌に有益であることがわかりました。CACL2メソッドによって調製された最大30日間の細菌の長期貯蔵は有益であり、選択がアンピシリンによるものであったが、テトラサイクリン耐性による場合ではなく、形質転換効率が持続的に増加しました。また、3日以上長く保存されている細菌を使用する場合は、定常相と対数相の細菌の変換効率の向上と、事前に潜入するステップが省略された場合の変換のないまたは効率の増加であることも発見されました。ハナハンの方法は最も労働と資源集約的であり、日常的に2 x 10の効率を与えました（7）。10（8）のより高い効率は、繰り返しの試行錯誤でのみ得られ、一貫して再現できませんでした。ポリエチレングリコール法は一貫して2 x 10（7）の効率を与え、バクテリアは毎日簡単に準備したり、効率の最小限の低下で凍結することができました。

Methods to optimize resources and transformation efficiency of routine daily transformations of DH1 Escherichia coli prepared by three calcium chloride methods were investigated and compared with polyethylene glycol and Hanahan methods. The benefit of a heat-shock step, a preplating incubation step to allow expression of antibiotic resistance, use of log phase bacteria and prolonged storage of bacteria were investigated using pBR322 and pUC18 plasmid DNAs. Bacteria prepared by CaCl2 methods consistently gave efficiencies of 4 x 10(6) transformants/microgram of plasmid DNA or better and were overall the most labor- and resource-efficient methods. Use of log phase bacteria, a heat shock and an incubation step were found to be beneficial for freshly prepared bacteria for all methods. Prolonged storage of up to 30 days of bacteria prepared by the CaCl2 methods was beneficial, resulting in a sustained increase in transformation efficiency when selection was by ampicillin but not when by tetracycline resistance. Also found when using bacteria stored three days or longer was an increased transformation efficiency of stationary vs. log phase bacteria and an unchanged or even increased efficiency when the preplating incubation step was omitted. The Hanahan methods were the most labor and resource intensive and routinely gave efficiencies of 2 x 10(7). Higher efficiencies of 10(8) were obtained only with repeated trial and error and were not consistently reproducible. The polyethylene glycol method consistently gave efficiencies of 2 x 10(7), and bacteria could easily be prepared daily or frozen with a minimal decrease in efficiency.