患者血清におけるインフリキシマブおよび抗体からフリキシマブレベルの測定のための均一な移動性シフトアッセイの開発と検証

インフリキシマブ（IFX）などの抗体ベースの薬物は、炎症性腸疾患（IBD）やその他の免疫介在性障害の治療に効果的です。これらの薬物に対する抗体の発生は、薬物の有効性の喪失、過敏症反応、その他の有害事象を含む不利な結果をもたらす可能性があります。したがって、血清薬物および抗薬物抗体レベルの正確なモニタリングは、抗体ベースの薬物で治療されている患者にとって治療の重要な部分であるべきです。さまざまなブリッジングELISAおよび放射性免疫測定法を含む抗薬物抗体および薬物レベルの評価のための現在の方法は、その感度、干渉、および/または複雑さによって制限されています。これらの制限を克服するために、血清サンプルの抗体（ATI）およびIFXレベルを測定するために、非ラジオラベル均質モビリティシフトアッセイ（HMSA）を開発しました。ATI-およびIFX-HMSAの両方で完全な方法検証を実行し、臨床サンプルテスト結果を、2つのアッセイ間のパフォーマンスの違いを評価するために、ブリッジングELISAメソッドから得られたものと比較しました。ATI-HMSAの検証により、血清中の0.012μg/mLの定量の下限が明らかになりました。定量の定量範囲は0.029-0.54μg/mLでした。アッセイ内およびアッセイ間精度は、変動係数（CV）の20％未満であり、アッセイの精度（％誤差）は20％未満でした。血清サンプルでは、​​血清中の60μg/mLのIFXの存在下であっても、0.036μg/mlという低いATIを測定できます。100人の健康な被験者の血清をテストして、アッセイのカットポイントを決定しました。100人の患者からのブリッジングELISAを使用して以前に分析されたATI陽性サンプルも、新しい方法で測定されました。ATIレベルの2つの方法の間には高い相関がありました（P <0.001）。重要なことに、新しい方法では、ブリッジングELISAメソッドから5つの偽陽性サンプルを特定しました。モビリティシフトIFXアッセイの検証は、高いアッセイの感度、精度、精度も示しました。HMSA法は、血清薬物および抗薬物抗体レベルを正確に検出するために、他のタンパク質ベースの薬物に適用することもできます。

Antibody-based drugs such as infliximab (IFX) are effective for the treatment of inflammatory bowel disease (IBD) and other immune-mediated disorders. The development of antibodies against these drugs may result in unfavorable consequences, including the loss of drug efficacy, hypersensitivity reactions, and other adverse events. Therefore, accurate monitoring of serum drug and anti-drug antibody levels should be an important part of therapy for patients being treated with an antibody-based drug. Current methods for the assessment of anti-drug antibodies and drug levels, involving various bridging ELISA and radioimmunoassay techniques, are limited by their sensitivity, interference, and/or complexity. To overcome these limitations, we have developed a non-radiolabeled homogeneous mobility shift assay (HMSA) to measure the antibodies-to-infliximab (ATI) and IFX levels in serum samples. Full method validation was performed on both the ATI- and IFX-HMSA, and the clinical sample test results were also compared with those obtained from a bridging ELISA method to evaluate the difference in performance between the two assays. Validation of the ATI-HMSA revealed a lower limit of quantitation of 0.012 μg/mL in serum. The linear range of quantitation was 0.029-0.54 μg/mL. The intra- and inter-assay precision was less than 20% of coefficient of variation (CV), and the accuracy (% error) of the assay was less than 20%. In serum samples, ATI as low as 0.036 μg/mL can be measured, even in the presence of 60 μg/mL of IFX in the serum. Sera from 100 healthy subjects were tested to determine the cut point of the assay. ATI-positive samples that had been previously analyzed by using a bridging ELISA from 100 patients were also measured by the new method. There was a high correlation between the two methods for ATI levels (p<0.001). Significantly, the new method identified five false-positive samples from the bridging ELISA method. Validation of the mobility shift IFX assay also showed high assay sensitivity, precision and accuracy. The HMSA method may also be applied to other protein-based drugs to accurately detect serum drug and anti-drug antibody levels.