Furinを介した基質処理におけるポリフェノールの阻害活性の制限

最近、選択されたポリフェノールが、蛍光ペプチド基質のin vitro切断でプロプロテインコンバーターゼ（PC）阻害活性を発揮することが報告され、この抗侵害活性がこれらのポリフェノールの報告された抗癌特性の原因であると結論付けられました。これにより、Pro-IGF-1RがFurinのようなPCによって生物活性化されるため、IGF-1R媒介腫瘍形成に影響を与える可能性のあるポリフェノールを阻害するPCを特定する調査が促されました。ヒト・フリン（Hfurin（573））による蛍光ペプチド基質Pyr-RTKR-AMCのin vitro切断への影響に対するポリフェノールの初期スクリーニングは、実際にさまざまな阻害効果を明らかにしました。（ - ）EGCG、クライシン、およびケルセチンは、in vitroで基質として溶解していないジフテリア毒素を使用して評価されました。ただし、処理に抑制的な影響を示すものはありませんでした。フリンとジフテリア毒素タンパク質の両方への（ - ）EGCGの結合が実証されました。その後、テストされた7つのポリフェノールについて、カゼインまたはガンマグロブリンの添加により、in vitro pyrrtkr-amc切断阻害の減少または消滅がもたらされることがわかりました。Furin阻害剤の非A-D-アルギニンでは、そのような効果は見られませんでした。選択したポリフェノールの可能な効果を調査するためのウエスタンブロット研究腫瘍形成リンクされたプロテインpro-IGF-1Rおよびpro-GPC3の細胞のプロセシングに対するプロセシングも阻害効果を明らかにしませんでした。結論として、我々の結果は、in vitroでの蛍光ペプチド基質切断に対するポリフェノールの報告されたPC阻害効果を確認します。しかし、データは、Hfurin（573）を介したin vitro蛍光ペプチド基質切断に対するポリフェノール阻害効果を、in vitroまたは細胞内であろうと、本物のプロプロラテインの処理に同様の効果に外挿できないことを示しています。これは、報告されたポリフェノール抗がん特性の反プロテアーゼの根拠を損ないます。

Recently, selected polyphenols were reported to exert proprotein convertase (PC) inhibitory activities on in vitro cleavage of a fluorogenic peptide substrate and it was concluded that this anti-protease activity might be responsible for the reported anti-cancer properties of these polyphenols. This prompted investigations to identify PC inhibiting polyphenols that could affect IGF-1R-mediated tumorigenesis since pro-IGF-1R is bioactivated by PCs like furin. Initial screening of polyphenols for their impact on in vitro cleavage of fluorogenic peptide substrate Pyr-RTKR-AMC by human furin (hfurin(573)) indeed revealed varying inhibitory effects. (-)EGCG, chrysin, and quercetin, were subsequently evaluated using uncleaved diphtheria toxin as substrate in vitro. However, none displayed any inhibitory impact on processing. Binding of (-)EGCG to both furin and the diphtheria toxin protein was demonstrated. Subsequently, it was found that for seven polyphenols tested, addition of casein or gamma globulin led to reduction or even annihilation of in vitro Pyr- RTKR-AMC cleavage inhibition. No such effect was seen with the furin inhibitor nona-D-arginine. Western blot studies to investigate possible effects of selected polyphenols on processing in cells of the tumorigenesis-linked proproteins pro-IGF-1R and pro-GPC3 also revealed no inhibitory effects. In conclusion, our results confirm the reported PC inhibitory effects of polyphenols on fluorogenic peptide substrate cleavage in vitro. However, the data show that polyphenolic inhibitory effects on hfurin(573)-mediated in vitro fluorogenic peptide substrate cleavage cannot be extrapolated to similar effects on processing of genuine proproteins, whether in vitro or in cells. This undermines the anti-protease rationale for the reported polyphenolic anti-cancer properties.