チアゾールオレンジを使用した網状赤血球カウントフローサイトメトリー法

最近、顕微鏡網状赤血球数を置き換えるために、フローサイトメトリー技術が開発されました。RNA結合蛍光色素であるチアゾールオレンジを使用して、網状赤血球を成熟赤血球と識別しました。チアゾールオレンジとリチックカウントソフトウェアパッケージは、さまざまなフロー機器でのルーチン分析のパフォーマンスについて評価されました。適用された方法論は、簡単に実行された方法で半自動的に10個の細胞を分析しました。Dipotassium EDTA抗凝固血液（静脈後30時間安定）、チアゾールオレンジ溶液のインキュベーション時間は25度Cで25度の範囲で得られた一貫した結果が得られました。結果。最大30度Cまでのインキュベーション温度の変化は、測定可能な効果はありませんでした。得られた値は、正常、低、高網状細胞数の良好な直線性、精度、精度を示しました。しかし、干渉が観察されました：RBCの自己蛍光、核形成RBC、ハウエルジョリーボディ、高い白血球数、高血小板数、および巨大血小板はすべて、網状赤血球の数を誤って増加させました。これらのアーティファクトはソフトウェアゲートの補正によって排除されたため、微視的な方法によって再分析される試験片の5％未満が残っています。チアゾールオレンジフローサイトメトリック法は、網状赤血球の日常的な臨床定量のための高速で信頼できる方法であると判断されました。

Recently flow cytometry techniques have been developed to replace the microscope reticulocyte count. We used thiazole orange, a RNA binding fluorochrome, to discriminate reticulocytes from mature erythrocytes. Thiazole orange and the Retic-COUNT software package were evaluated for performance of routine analysis on different flow instruments. The applied methodology analysed 10(4) cells semi-automatically in an easily performed manner. Consistent results were obtained with dipotassium EDTA anticoagulated blood (stable for 30 h after venesection), with incubation times in thiazole orange solution ranging from 2 to 7 h at 25 degrees C. This allowed flexibility in specimen collection and storage and assay performance with no change in results. Changes of incubation temperature up to 30 degrees C had no measurable effect. The values obtained showed good linearity, precision and accuracy for normal, low and high reticulocyte counts. However interferences were observed: RBC autofluorescence, nucleated RBC, Howell-Jolly bodies, high leucocyte count, high platelet count and giant platelets, all falsely increased the number of reticulocytes. These artifacts were eliminated by software gate corrections, thus leaving less than 5% of the specimen to be reanalysed by the microscopic method. The thiazole orange flow cytometric method was determined to be a fast, reliable method for the routine clinical quantitation of reticulocytes.