クロセチンの経口投与は、マウスのN-メチル-D-アスパラギン酸によって誘発される内部網膜損傷を防ぎます

クロシンのアグリコンであるクロセチンは、サフランクロッカス（クロッカススタースL.）のスティグマに見られ、伝統医学で使用されています。マウス網膜におけるN-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）によって誘発される損傷に対するクロセチンの経口投与の影響を調査しました。クロセチンは、NMDAの硝子体内注射の前後に経口投与されました。神経節細胞層（GCL）の細胞数を数えることにより、組織学的分析が実施されました。細胞アポトーシスは、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼDUTPニックエンド標識（TUNEL）の陽性細胞をカウントすることにより評価されました。網膜機能は、電気網膜（ERG）を使用してAおよびB波振幅の観点から測定されました。カスパーゼ-3/7と切断されたカスパーゼ-3発現の活性化がアッセイされました。カルパイン活性は、α-スペクトリンのタンパク質分解のための免疫ブロッティングアッセイによって評価されました。NMDA注射はGCLの細胞数を減少させ、100 mg/kgの用量でクロセチンがこの減少を阻害しました。TUNEL陽性細胞は、NMDA注射後にGCLと内核層（INL）の両方で観察され、クロセチンはTUNEL陽性細胞の数の増加を阻害しました。ERG分析により、AおよびB波振幅の両方がNMDA注射により減少することが示されました。クロセチンは、B波振幅の減少を阻害しましたが、A波では抑制されませんでした。NMDA注射は、カスパーゼ-3/7を活性化し、GCLおよびINLで切断されたカスプターゼ-3の発現を増加させましたが、これらのプロセスは両方ともクロセチンによって阻害されました。NMDA注射はまた、α-スペクトリンの切断を誘発しましたが、クロセチンはこのプロセスに影響しませんでした。これらの発見は、クロセチンの経口投与により、カスパーゼ経路の阻害を介してNMDA誘発性網膜損傷を防止したことを示しています。

Crocetin, an aglycone of crocin, is found in stigmas of the saffron crocus (Crocus starus L.) and has been used in traditional medicine. We investigated the effects of oral administration of crocetin on damage induced by N-methyl-D-aspartate (NMDA) in the murine retina. Crocetin was orally administered before and after intravitreal injection of NMDA. A histological analysis was conducted by counting the cell number of ganglion cell layer (GCL). Cell apoptosis was assessed by counting cells positive for terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling (TUNEL). Retinal functions were measured in terms of a- and b-wave amplitudes using an electroretinogram (ERG). Activation of caspase-3/7 and cleaved caspase-3 expression were assayed. Calpain activity was evaluated by immunoblotting assays for proteolysis of α-spectrin. NMDA injection decreased the cell number in the GCL, and crocetin at a dose of 100 mg/kg inhibited this reduction. TUNEL-positive cells were observed in both GCL and inner nuclear layer (INL) after NMDA injection, and crocetin inhibited the increase in number of TUNEL-positive cells. ERG analysis showed that both a- and b-wave amplitudes were decreased by NMDA injection. Crocetin inhibited the reduction in the b-wave amplitude, but not in the a-wave. NMDA injection activated caspase-3/7 and increased expression of cleaved caspsase-3 in the GCL and INL, but both of these processes were inhibited by crocetin. NMDA injection also induced cleavage of α-spectrin, but crocetin did not affect this process. These findings indicate that oral administration of crocetin prevented NMDA-induced retinal damage via inhibition of the caspase pathway.