MLH1メチル化スクリーニングは、エピミューションキャリアを特定するのに効果的です

最近、憲法上のMLH1エピンテーションは、リンチ症候群（LS）症例のサブセットで特定されています。この研究の目的は、LS、MLH1メチル化腫瘍、および不一致修復（MMR）遺伝子における非検出された生殖細胞変異の臨床的疑いを持つ34人の患者のセットにおける憲法上のMLH1エピンテーションを抱える患者の同定でした。MLH1プロモーターメチル化は、MS-MLPA（メチル化特異的多重ライゲーション依存プローブ増幅）によるリンパ球DNAサンプルで分析されました。MLH1憲法のメチル化の確認は、MS-MCA（メチル化特異的融解曲線分析）、さまざまな生物学的サンプルでのビスライトシーケンス、およびパイロシーケンスによって実施されました。対立遺伝子発現は、ヘテロ接合の多型を使用して決定されました。垂直伝達は、MS-MLPAおよびハプロタイプ分析によって評価されました。MS-MLPA分析では、結腸直腸癌がMLH1メチル化を示した34人のうち2人のうち2人で構成MLH1メチル化が検出されました（5.9％）。これらの結果は、胆汁産生ベースの方法によって確認されました。両方のエピミューションキャリアは、左後期発症LS腫瘍を発症しており、第一級の親relativeのLS関連癌の家族歴はありませんでした。1つの症例では、特定されたMLH1憲法メチル化はモノアレンであり、MLH1およびEPM2AIP1対立遺伝子特異的転写サイレンシングの結果です。それは正常な体性組織に存在し、精子には存在しませんでした。メチル化されたMLH1対立遺伝子は母体に伝染し、同じ対立遺伝子を継承した娘でメチル化が逆転しました。早期発症MLH1-メチル化LS関連腫瘍の患者からのリンパ球DNAのMLH1メチル化スクリーニングにより、エピムライティングキャリアの同定が可能になります。本研究では、SOMA全体のMLH1エピミューションとその遺伝性の新興エンティティにさらなる証拠を追加します。

Recently, constitutional MLH1 epimutations have been identified in a subset of Lynch syndrome (LS) cases. The aim of this study was the identification of patients harboring constitutional MLH1 epimutations in a set of 34 patients with a clinical suspicion of LS, MLH1-methylated tumors and non-detected germline mutations in mismatch repair (MMR) genes. MLH1 promoter methylation was analyzed in lymphocyte DNA samples by MS-MLPA (Methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification). Confirmation of MLH1 constitutional methylation was performed by MS-MCA (Methylation-specific melting curve analysis), bisulfite sequencing and pyrosequencing in different biological samples. Allelic expression was determined using heterozygous polymorphisms. Vertical transmission was evaluated by MS-MLPA and haplotype analyses. MS-MLPA analysis detected constitutional MLH1 methylation in 2 of the 34 individuals whose colorectal cancers showed MLH1 methylation (5.9%). These results were confirmed by bisulfite-based methods. Both epimutation carriers had developed metachronous early-onset LS tumors, with no family history of LS-associated cancers in their first-degree relatives. In one of the cases, the identified MLH1 constitutional methylation was monoallelic and results in MLH1 and EPM2AIP1 allele-specific transcriptional silencing. It was present in normal somatic tissues and absent in spermatozoa. The methylated MLH1 allele was maternally transmitted and methylation was reversed in a daughter who inherited the same allele. MLH1 methylation screening in lymphocyte DNA from patients with early-onset MLH1-methylated LS-associated tumors allows the identification of epimutation carriers. The present study adds further evidence to the emerging entity of soma-wide MLH1 epimutation and its heritability.