高性能液体クロマトグラフィータンデム質量分析によるヒト血漿中のメトホルミンとグリピジドの同時定量化と薬物動態研究へのその応用

選択的で敏感で迅速な高性能液体クロマトグラフィータンデム質量分析（HPLC-MS/MS）メソッドが開発され、検証され、フェナセチンを内部標準（IS）として使用してヒト血漿でメトホルミンとグリピジドを同時に決定しました。メタノール、メトホルミン、グリピジドを含む200μLの血漿の1段階のタンパク質沈殿後、メタノール-10mmol/で構成されるアイスクロス移動相を使用して、40°Cでクロマシルフェニルカラム（4.6×150 mm、5 µm）で分離されました。l流量0.35 ml/minでの酢酸アンモニウム（75:25、v/v）。エレクトロスプレーイオン化源が適用され、陽性モードで動作しました。前駆体→m/z 130→m/z 71、m/z 446→m/z 321およびm/z 180→m/z 110の積イオンの組み合わせを使用した複数の反応モニタリングを使用して、メトホルミン、グリピジド、およびISを定量化しました。それぞれ。線形キャリブレーション曲線は、メトホルミンでは4.10-656 ng/ml、グリピジドでは2.55-408 ng/mlの濃度範囲で得られました。日内および日内精度の相対標準偏差は10％未満であり、精度の相対誤差は-7.0〜4.6％でした。提示されたHPLC-MS/MS法は、経口投与後の健康なボランティアにおけるメトホルミン塩酸塩およびグリピジド錠剤の薬物動態研究に適していることが証明されました。

A selective, sensitive and rapid high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method was developed and validated to determine metformin and glipizide simultaneously in human plasma using phenacetin as internal standard (IS). After one-step protein precipitation of 200 μL plasma with methanol, metformin, glipizide and IS were separated on a Kromasil Phenyl column (4.6 × 150 mm, 5 µm) at 40°C with an isocratic mobile phase consisting of methanol-10 mmol/L ammonium acetate (75:25, v/v) at a flow rate of 0.35 mL/min. Electrospray ionization source was applied and operated in the positive mode. Multiple reaction monitoring using the precursor → product ion combinations of m/z 130 → m/z 71, m/z 446 → m/z 321 and m/z 180 → m/z 110 were used to quantify metformin, glipizide and IS, respectively. The linear calibration curves were obtained over the concentration ranges 4.10-656 ng/mL for metformin and 2.55-408 ng/mL for glipizide. The relative standard deviation of intra-day and inter-day precision was below 10% and the relative error of accuracy was between -7.0 and 4.6%. The presented HPLC-MS/MS method was proved to be suitable for the pharmacokinetic study of metformin hydrochloride and glipizide tablets in healthy volunteers after oral administration.