組換え高分子量 - グルテニンサブユニット特異的IgE検出は、組換えオメガ-5グリアジン特異的IgEテストを相補的に補完する小麦依存性運動誘発アナフィラキシーを特定するのに役立ちます

背景：小麦依存性の運動誘発アナフィラキシー（WDEIA）は、小麦産物の摂取後に運動によって通常誘発される特別な形態の食物アレルギーです。小麦オメガ-5グリアジンと高分子量 - グルテニンサブユニット（HMW-グルテニン）をWDEIAの主要なアレルゲンとして特定し、これらのアレルゲンの合成エピトープペプチドへの血清IgE結合の同時検出を明らかにしました。ただし、短い合成ペプチドは、アレルゲン特異的IgEの検出に広く利用されているキャップ蛍光酵素 - 免疫アッセイ（CAP-FEIA）には適していません。 目的：この研究では、組換えHMW-グルテニンを含むCAP-FEIAを構築し、WDEIAの患者を特定する際の有用性を評価しました。 方法：組換えHMW-グルテニンは、大腸菌のヒスチジンタグタンパク質として発現し、ヒスチジンタグ親和性カラムによって精製されました。小麦、グルテン、組換えオメガ-5グリアジン、HMW-グルテニンのエピトープペプチド、Wdeiaの48人の患者、Atopic皮膚炎（AD）（AD）の患者16人の患者からの48人の患者の血清における天然および組換えHMW-グルテニン特異的IgEのエピトープペプチド）摂取と12人の健康なコントロールは、CAP-FEIAメソッドを使用して決定されました。 結果：小麦アレルギーのない16人のAD患者12（75％）は、HMW-グルテニンのエピトープペプチド（12.5％）および組換えHMW-グルテニン試験（12.5％）とは対照的に、天然のHMW-グルテニン試験に対して陽性の結果をもたらしました。これらの結果は、ネイティブのHMW-グルテニン検査が特異性が低いことを示しています。組換えHMW-グルテニンによるIgEテストの感度と特異性は16.7％および92.9％でした。これらは、HMW-グルテニンのエピトープペプチドを使用して得られた結果とよく互換性があります。ただし、組換えオメガ-5グリアジンとのテストと組み合わされたとき、感度と特異性は93.8％と92.9％に達しました。 結論と臨床的関連性：組換えHMW-グルテニンは、安定性と特異性の点でCAP-FEIAシステムに最適であることを実証し、組換えHMW-グルテニンに対する特定のIgEの検出は、キャップフェイアと組み合わせた場合のWDEIAの診断に有用であることを確認しました。（組換えオメガ-5グリアジン）テスト。

BACKGROUND: Wheat-dependent exercise-induced anaphylaxis (WDEIA) is a special form of food allergy typically induced by exercise after ingestion of wheat products. We identified wheat omega-5 gliadin and high molecular weight-glutenin subunit (HMW-glutenin) as major allergens for WDEIA and clarified that simultaneous detection of serum IgE binding to synthetic epitope peptides of these allergens identifies more than 90% of WDEIA patients. However, the short synthetic peptides are not suitable for CAP-fluorescent enzyme-immunoassay (CAP-FEIA), which is widely utilized for detecting allergen-specific IgE. OBJECTIVE: In this study, we constructed a CAP-FEIA with recombinant HMW-glutenin, and evaluated its usefulness in identifying the patients with WDEIA. METHODS: Recombinant HMW-glutenin was expressed as histidine-tag protein in E. coli and purified by histidine-tag affinity column. Wheat, gluten, recombinant omega-5 gliadin, epitope peptide of HMW-glutenin, native and recombinant HMW-glutenin specific IgE in the sera from 48 patients with WDEIA, 16 patients with atopic dermatitis (AD) who had no immediate allergic reaction after wheat ingestion and 12 healthy controls were determined by using CAP-FEIA method. RESULTS: In 16 AD patients without wheat allergy 12 of them (75%) had positive results for native HMW-glutenin test in contrast to epitope peptide of HMW-glutenin (12.5%) and recombinant HMW-glutenin test (12.5%). These results indicate the native HMW-glutenin test has low specificity. Sensitivity and specificity of the IgE test with recombinant HMW-glutenin were 16.7% and 92.9%. These are well compatible with results obtained by using epitope peptide of HMW-glutenin. However, sensitivity and specificity reached to 93.8% and 92.9%, when the test was combined to the test with recombinant omega-5 gliadin. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: We demonstrated that recombinant HMW-glutenin is best for CAP-FEIA system in point of stability and specificity and confirmed that detection of specific IgE against recombinant HMW-glutenin is useful for diagnosis of WDEIA when combined with the CAP-FEIA (recombinant omega-5 gliadin) test.