Streptomyces sp xznum 00004からの線維溶解酵素の精製と特性評価

Streptomyces sp。XZNUM 00004は、硫酸アンモニウム沈殿、ポリアクリルアミドゲル、DEAE-セファロース高速流動交換、ゲルろ過クロマトグラフィーなどの方法で電気泳動の均一性に精製されました。SFE1の分子量は、SDS-PAGE、フィブリンザイモグラフィー、およびゲルろ過クロマトグラフィーにより20 kDaと推定されました。等電点は4.9でした。k（m）およびv（max）値は、それぞれ0.96 mg/mlと181.8単位/mlでした。pH 5.0-8.0で非常に安定していて、65°C未満でした。酵素活性の最適pHは7.8でした。最適な温度は35°Cでした。SFE1の線維分解活性は、Na（+）、K（+）、Mn（2+）、Mg（2+）、Zn（2+）およびCo（2+）によって強化されました。逆に、Cu（2+）は強い阻害を示しました。さらに、線維溶解活性はPMSFによって強く阻害され、EDTAおよびEGTAによって部分的に阻害されました。SFE1は、フィブリノーゲンのAα鎖を急速に加水分解し、続いてBβ鎖と最後にγ鎖が続きました。N末端配列の最初の15アミノ酸はApitlsqghvdvvdiでした。さらに、SFE1はフィブリンを直接消化し、in vitroでプラスミノーゲン活性化因子によるものではありません。SFE1は、血栓溶解療法の潜在的な候補としてさらに開発できます。

A fibrinolytic enzyme (SFE1) from Streptomyces sp. XZNUM 00004 was purified to electrophoretic homogeneity with the methods including ammonium sulfate precipitation, polyacrylamide gel, DEAE-Sepharose Fast Flow anion exchange and gel-filtration chromatography. The molecular weight of SFE1 was estimated to be 20 kDa by SDS-PAGE, fibrin zymography, and gel filtration chromatography. The isoelectric point was 4.9. K (m) and V (max) values were 0.96 mg/ml and 181.8 unit/ml, respectively. It was very stable at pH 5.0-8.0 and below 65 °C. The optimum pH for enzyme activity was 7.8. The optimum temperature was 35 °C. The fibrinolytic activity of SFE1 was enhanced by Na(+), K(+), Mn(2+), Mg(2+), Zn(2+) and Co(2+). Conversely, Cu(2+) showed strong inhibition. Furthermore, the fibrinolytic activity was strongly inhibited by PMSF, and partly inhibited by EDTA and EGTA. SFE1 rapidly hydrolyzed the Aα-chain of fibrinogen, followed by the Bβ-chain and finally the γ-chain. The first 15 amino acids of the N-terminal sequence were APITLSQGHVDVVDI. Additionally, SFE1 directly digested fibrin and not by plasminogen activators in vitro. SFE1 can be further developed as a potential candidate for thrombolytic therapy.