チロシン濃縮タンパク質の濃縮と検出

ニトロチロシンは、チロシンまたは他の遺伝的エンコードアミノ酸とは明らかに異なる特性を持つ翻訳後修飾アミノ酸です。ニトロチロシンを含むタンパク質の検出は、健康と疾患におけるニトロチロシンの役割をよりよく理解するための最初のステップです。さらに、ニトロチロシンの程度を定量化し、タンパク質でその位置を決定することは、生物学的機能に対するチロシン硝化の効果をよりよく理解するための基礎を形成します。このユニットで説明されているのは、アミノチロシン、サリチルアルデヒド、およびAL（3+）の間に蛍光錯体を作成した後、組織切片およびウエスタンブロットでチロシン栄養タンパク質を検出する方法です。さらに、複雑なサンプルからペプチドを豊かにするために、アミノチロシンをビオチンで標識するためのアプローチが詳細です。どちらの方法でも、ニトロチロシンのアミノチロシンへの還元が必要であり、これはナトリウムジチオナイトまたはヘミンとジチオトレイトールで達成できます。

Nitrotyrosine is a post-translationally modified amino acid with distinctly different properties than tyrosine or any other of the genetically encoded amino acids. Detecting proteins containing nitrotyrosine is the first step towards a better understanding of the role of nitrotyrosine in health and disease. Moreover, quantifying the extent of nitrotyrosine and determining its location in a protein forms the basis for a better understanding of the effect of tyrosine nitration on biological function. Described in this unit is a method to detect tyrosine-nitrated proteins in tissue sections and on western blots after creating a fluorescent complex between aminotyrosine, salicylaldehyde, and Al(3+). In addition, an approach is detailed for labeling aminotyrosine with biotin to enrich peptides from complex samples. Both methods require reduction of nitrotyrosine to aminotyrosine, which can be achieved with sodium dithionite or hemin plus dithiothreitol.