RNase H2開始リボヌクレオチド切除修復

リボヌクレオチドは、1 kbあたり約2の周波数で複製DNAポリメラーゼによってDNAに組み込まれているため、細胞内で最も豊富な潜在的なDNA損傷の潜在的なDNA損傷を断然します。それらの除去は、安定した無傷の染色体を回復するために不可欠です。ここでは、Saccharomyces cerevisiaeから精製した酵素を使用したリボヌクレオチド切除修復（RER）経路の完全な生化学的再構成を提示します。RERは、リボヌクレオチドがRNase H2によって切開され、DNAポリメラーゼΔ、PCNAクランプ、ローダーRFCによって実行され、DNAリガーゼIによって完了した鎖変位合成でフラップエンドヌクレアーゼFEN1によってさらに切除される場合に最も効率的です。この経路のいくつかの酵素の冗長性。EXO1は、FEN1とPOLεを合理的な効率でPolδに置き換えます。ただし、RNase H1は、RERの切開ステップでRNase H2を代用できません。

Ribonucleotides are incorporated into DNA by the replicative DNA polymerases at frequencies of about 2 per kb, which makes them by far the most abundant form of potential DNA damage in the cell. Their removal is essential for restoring a stable intact chromosome. Here, we present a complete biochemical reconstitution of the ribonucleotide excision repair (RER) pathway with enzymes purified from Saccharomyces cerevisiae. RER is most efficient when the ribonucleotide is incised by RNase H2, and further excised by the flap endonuclease FEN1 with strand displacement synthesis carried out by DNA polymerase δ, the PCNA clamp, its loader RFC, and completed by DNA ligase I. We observed partial redundancy for several of the enzymes in this pathway. Exo1 substitutes for FEN1 and Pol ε for Pol δ with reasonable efficiency. However, RNase H1 fails to substitute for RNase H2 in the incision step of RER.