マウス肺胞タイプII上皮細胞の効率的かつ迅速な分離と精製

肺胞表面は、I型とII型細胞の2つの主要な細胞タイプで構成される上皮で覆われています。肺胞型II（ATII）細胞は、尖端微小villiと特徴的なラメラ体を伴う明確な形態を持っています。これは、肺界面活性剤の細胞内貯蔵型です。ATII細胞は、自然免疫に重要な役割を果たし、肺界面活性剤を産生および分泌します。彼らは、より敏感なタイプI細胞に損傷を与えた後、上皮を回復するために増殖しました。マウスからATII細胞を分離および精製する効率的かつ迅速な方法を開発しました。肺胞上皮細胞をマウス肺でイスケースで解離し、肺組織に紳士の解離剤で静かに採掘しました。ATII細胞精製は、CD45マイクロビーズによる負の枯渇を使用して、MACS LSカラムのストレプトアビジンマイクロビーズを使用した磁気標識により上皮細胞接着分子（EP-CAM）のポジティブ選択を使用して実施されました。フローサイトメトリーで測定されたこれらの細胞の純度は、EP-CAMおよびサイトケラチンとの共染色およびEP-CAMとSP-Aとの共染色でそれぞれ最大92.1％および91.1％でした。結果として生じるATII細胞集団には、純度、生存率、収量が高くなります。分離および培養ATII細胞の表現型は、電子顕微鏡写真、界面活性剤タンパク質（SP-A、ProSP-B、Prosp-B、Prosp-C、SP-D）の発現、および西部ブロッティングによるリソホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（LPCAT）によって確認されました。および免疫細胞蛍光。このプロトコルは表面抗原に基づいており、我々のデータは、マウスATII細胞が急速に分離され、効率的に精製され、効果的に培養できることを実証しました。

The alveolar surface is covered by an epithelium composed of 2 main cell types: type I and type II cells. Alveolar type II (ATII) cells have a distinct morphology with apical microvilli and characteristic lamellar bodies, which are the intracellular storage form of pulmonary surfactant. ATII cells play an important role in innate immunity and produce and secrete pulmonary surfactant. They proliferate to restore the epithelium after damage to the more sensitive type I cells. We developed an efficient and rapid method to isolate and purify ATII cells from mice. Alveolar epithelial cells were dissociated in the murine lung with dispase and lung tissue was gently minced with a GentleMACS Dissociator. ATII cell purification was performed using negative depletion with CD45 MicroBeads and positive selection for the epithelial-cell adhesion molecule (Ep-CAM) by magnetic labeling with Streptavidin MicroBeads in MACS LS columns. The purity of these cells as measured by flow cytometry was up to 92.1% and 91.1% for co-staining with Ep-CAM and cytokeratin and co-staining with Ep-CAM and SP-A, respectively. The resulting ATII cell population has a high purity, viability, and yield. The phenotype of isolated and cultured ATII cells was confirmed by electron micrographs, expression of surfactant proteins (SP-A, proSP-B, mature SP-B, proSP-C, SP-D), and lysophosphatidylcholine acyltransferase (LPCAT) by western blotting and immunocytofluorescence. This protocol is based on surface antigens and our data demonstrated that murine ATII cells can be rapidly isolated, efficiently purified, and effectively cultured.