抗体の親和性成熟：高品質のSCFVライブラリを生成し、高スループットスクリーニングによりIgG候補を隔離するための最適化方法

ますます多くの治療抗体が開発されるにつれて、抗体候補の親和性および/または特異性を効率的に改善するための堅牢な方法が必要です。ここでは、SCFVアフィニティ成熟とIgGハイスループットスクリーニングを組み合わせた強力なプラットフォームについて説明します。ランダム変異誘発技術（Mutagen™）の多様性を作成した後、SCFVライブラリは、ベータラクタマーゼ遺伝子を導入する融合システムを使用して完全にクリーニングされ、アンピシリン抵抗性に基づいてインフレームを選択し、コドンフリーバリアントを停止します。それによって構築された高品質のSCFVライブラリは、ファージディスプレイテクノロジーを使用してin vitroでターゲットで選択されます。標準手順とは反対に、IgG分子として限られた数のアフィニティ成熟SCFVを生成する代わりに、選択したSCFVのプール全体をIgG発現ベクターに直接転送し、急速なIgG小規模生産（96ウェル）を許可するクローンシステムを開発しました。哺乳類細胞。統合プロセスにより、高品質のSCFVライブラリを生成し、多数のIgGバリアントをテストすることができ、最適な治療抗体候補を選択する可能性が高くなります。

As a growing number of therapeutic antibodies are developed, robust methods to efficiently improve the affinity and/or specificity of antibody candidates are needed. Here we describe our powerful platform that combines scFv affinity maturation and IgG high-throughput screening. After creating diversity with our random mutagenesis technology (MutaGen™), the scFv libraries are fully cleaned using a fusion system introducing the beta-lactamase gene to select in-frame and stop codon free variants on the basis of ampicillin resistance. The high-quality scFv libraries thereby constructed are then selected on the target in vitro using phage display technology. Contrary to standard procedures, instead of producing a limited number of affinity matured scFv as IgG molecules, we developed a cloning system to directly transfer the entire pool of selected scFv into an IgG expression vector permitting rapid IgG small-scale production (96 wells) in mammalian cells. Our integrated process allows us to generate high-quality scFv libraries and test numerous IgG variants, increasing the chances to select the best therapeutic antibody candidate.