アフリカスノパスでi-scei meganucleaseを使用したトランスジェネシスの簡単な方法

ここでは、i-scei meganucleaseを使用してアフリカツメガエルでトランスジェニック胚を生成するためのプロトコルを提示します。この方法は、1つまたは2つのI-Scei Meganuclease部位を含むDNAコンストラクトの統合に依存しています。これは、トランスジェネシスのREMI法よりも単純な方法であり、アフリカツメガエルとトロピカリスでXenopus laevisとXenopusのトランスジェニック系統を生成するのに理想的に適しています。REMIメソッドよりも単純であることに加えて、このプロトコルはタンデムコンカテマーではなく単一コピー統合イベントも発生します。私たちが説明するプロトコルはX. tropicalisのものですが、この方法はX. laevisでトランスジェニック系統を生成するためにも使用できます。また、ゲノムの統合を促進するためのI-SCEIサイトとTOL2要素を含むマルチサイトゲートウェイ（®）クローニングに基づいて、ptransgenesisという名前のトランスジェネシスの複雑な構造を設計および生成するための便利な方法についても説明します。

Here we present a protocol for generating transgenic embryos in Xenopus using I-SceI meganuclease. This method relies on integration of DNA constructs, containing one or two I-SceI meganuclease sites. It is a simpler method than the REMI method of transgenesis, and it is ideally suited for generating transgenic lines in Xenopus laevis and Xenopus tropicalis. In addition to it being simpler than the REMI method, this protocol also results in single copy integration events rather than tandem concatemers. Although the protocol we describe is for X. tropicalis, the method can also be used to generate transgenic lines in X. laevis. We also describe a convenient method for designing and generating complex constructs for transgenesis, named pTransgenesis, based on the Multisite Gateway(®) cloning, which include I-SceI sites and Tol2 elements to facilitate genome integration.