ヒト化モノクローナル抗体とシリコンオイルエマルジョンの相互作用に対する励起具の効果

シリコンオイルのマイクロドロップレットのエマルジョンに対する3つのヒト化モノクローナル抗体の界面吸着は、サイズ排出高速液体クロマトグラムの統合されたピーク領域を介した間接的なピーク領域を使用して検査されました。シリコンオイルのレベルは、既知の注射器で使用される典型的なレベルをはるかに超えていました。3つの抗体は、さまざまな緩衝液製剤でシリコン油水界面に急速に吸着しました。10 mM L-ヒスチジンpH 6.0で緩衝された溶液に140 mM NaClを添加すると、吸着されたタンパク質の量が増加しました。逆に、0.03％（w/v）Tween®20の添加により、吸着の程度は有意に減少しました。アクリルアミドによる内因性トリプトファン蛍光消光から決定された船尾式定数は、吸着抗体の三次構造が著しく浸透したことを示唆しました。ただし、抗体の凝集または沈殿は検出されませんでした。蛍光標識抗体と光学顕微鏡実験を含む溶液中の蛍光染色されたシリコン油のエマルジョンのフローサイトメトリー分析は、エマルジョン中のシリコン油液滴の凝集が発生したことを示唆しました。吸着された抗体を伴うシリコンオイルマイクロドップレットについて測定されたゼータ電位は、液滴凝集が液滴衝突に対する静電エネルギー障壁の減少の結果であることを示唆しています。

The interfacial adsorption of three humanized monoclonal antibodies to emulsions of microdroplets of silicone oil was examined using indirect measurement via integrated peak areas in size-exclusion high-performance liquid chromatograms. The level of silicone oil far exceeded the typical levels used in prefillable syringes. The three antibodies rapidly adsorbed to silicone oil-water interfaces in various buffer formulations. Addition of 140 mM NaCl to solutions buffered with 10 mM l-histidine, pH 6.0, increased the amount of protein adsorbed. Conversely, the extent of adsorption was significantly decreased by the addition of 0.03% (w/v) Tween® 20. Stern-Volmer constants determined from intrinsic tryptophan fluorescence quenching by acrylamide suggested that the tertiary structure of the adsorbed antibodies was significantly perturbed. However, no aggregation or precipitation of the antibodies was detected. Flow cytometric analysis of emulsions of fluorescently stained silicone oil in solutions containing fluorescently labeled antibodies and light microscopy experiments suggested that agglomeration of silicone oil droplets in the emulsions occurred. Zeta potentials measured for silicone oil microdroplets with adsorbed antibodies suggested that droplet agglomeration was probably the result of reduced electrostatic energy barriers to droplet collisions.