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エンジニアリングされた亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ZFN）は、部位DNAで二本鎖突破（DSB）をサイト固有の方法で作成するための強力なツールです。ZFNによって生成されたこれらのDSBは、相同性指向の修復または非精神病末端結合によって修復できます。後者は、挿入または欠失変異体を生成するために悪用されます。公開された文献に基づいて、亜鉛フィンガーヌクレアーゼのペアを設計し、機能不全のCMPシアル酸トランスポーター遺伝子（SLC35A1）を持つ以前に報告されたCHO変異体でGDPフコース輸送体遺伝子（SLC35C1）を不活性化しました。得られた変異細胞株であるCHO-GMT5には、機能的なGDP-フコース輸送体とCMPシアル酸輸送体がありません。その結果、これらの細胞はアシアリル化およびアフコシル化糖タンパク質のみを産生することができます。現在、ヒトIgG1のASN（297）に付着したN-グリカンからのコアフコースを除去すると、その受容体であるFcγRIIIAへの結合が大幅に促進され、それにより抗体依存性細胞毒性（ADCC）が劇的に改善されることが広く認識されています。最近の報告によると、IgG1からのシアル酸の除去もADCCを促進することが示されました。したがって、CHO-GMT5は、ADCCが強化された組換え抗体の産生において、より有利な細胞株を表している可能性があります。これらの細胞は、野生型CHO-K1細胞と妥協のないトランスフェクション効率に匹敵する成長率を示しており、生産ラインとして使用することを望んでいます。
エンジニアリングされた亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ZFN）は、部位DNAで二本鎖突破（DSB）をサイト固有の方法で作成するための強力なツールです。ZFNによって生成されたこれらのDSBは、相同性指向の修復または非精神病末端結合によって修復できます。後者は、挿入または欠失変異体を生成するために悪用されます。公開された文献に基づいて、亜鉛フィンガーヌクレアーゼのペアを設計し、機能不全のCMPシアル酸トランスポーター遺伝子（SLC35A1）を持つ以前に報告されたCHO変異体でGDPフコース輸送体遺伝子（SLC35C1）を不活性化しました。得られた変異細胞株であるCHO-GMT5には、機能的なGDP-フコース輸送体とCMPシアル酸輸送体がありません。その結果、これらの細胞はアシアリル化およびアフコシル化糖タンパク質のみを産生することができます。現在、ヒトIgG1のASN（297）に付着したN-グリカンからのコアフコースを除去すると、その受容体であるFcγRIIIAへの結合が大幅に促進され、それにより抗体依存性細胞毒性（ADCC）が劇的に改善されることが広く認識されています。最近の報告によると、IgG1からのシアル酸の除去もADCCを促進することが示されました。したがって、CHO-GMT5は、ADCCが強化された組換え抗体の産生において、より有利な細胞株を表している可能性があります。これらの細胞は、野生型CHO-K1細胞と妥協のないトランスフェクション効率に匹敵する成長率を示しており、生産ラインとして使用することを望んでいます。
Engineered zinc-finger nucleases (ZFNs) are powerful tools for creating double-stranded-breaks (DSBs) in genomic DNA in a site-specific manner. These DSBs generated by ZFNs can be repaired by homology-directed repair or nonhomologous end joining, in which the latter can be exploited to generate insertion or deletion mutants. Based on published literature, we designed a pair of zinc-finger nucleases and inactivated the GDP-fucose transporter gene (Slc35c1) in a previously reported CHO mutant that has a dysfunctional CMP-sialic acid transporter gene (Slc35a1). The resulting mutant cell line, CHO-gmt5, lacks functional GDP-fucose transporter and CMP-sialic acid transporter. As a result, these cells can only produce asialylated and afucosylated glycoproteins. It is now widely recognized that removal of the core fucose from the N-glycans attached to Asn(297) of human IgG1 significantly enhances its binding to its receptor, FcγRIIIa, and thereby dramatically improves antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). Recent reports showed that removal of sialic acid from IgG1 also enhances ADCC. Therefore, CHO-gmt5 may represent a more advantageous cell line for the production of recombinant antibodies with enhanced ADCC. These cells show comparable growth rate to wild type CHO-K1 cells and uncompromised transfection efficiency, which make them desirable for use as a production line.
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