サイトメガロウイルス出口タンパク質PM53の保存された領域2欠損変異体の特性評価

ドミナントネガティブ（DN）変異体は、必須タンパク質間相互作用を研究するための強力なツールです。必須マウスサイトメガロウイルス（MCMV）タンパク質PM53の系統的な遺伝的スクリーンは、保存された領域2（CR2）およびCR4内の阻害変異の蓄積を特定しました。これらのCR4変異体の強い阻害潜在性は、特定の表現型によって特徴付けられます。CR2の小さな挿入変異のDN効果は、分析するには弱すぎました（M. Popa、Z。Ruzsics、M。Lötzerich、L。Dölken、C。Busher、P。Walther、およびU. H. Koszinowski、J。Virol。84：9035-9046、2010）;したがって、本研究では、CR2（完全または部分的に）を欠くM53対立遺伝子の構築と、条件付き発現時のMCMV複製に対するDN効果のその後の検査について説明しています。Cr2欠損PM53の過剰発現は、ウイルス産生を約10,000倍阻害しました。これは、核からのカプシド輸出とウイルスゲノム切断/包装による干渉によるものでした。さらに、DN PM53の過剰発現の存在下での核包囲複合体の運命を分析しました。CR2変異体は、野生型タンパク質よりも低い程度ではあるものの、PM50に結合することができ、感染細胞の野生型核エンベロープ錯体を再局在化しました。CR4 DNとは異なり、CR2 DN変異体はPM50の安定性に影響しませんでした。

Dominant-negative (DN) mutants are powerful tools for studying essential protein-protein interactions. A systematic genetic screen of the essential murine cytomegalovirus (MCMV) protein pM53 identified the accumulation of inhibitory mutations within conserved region 2 (CR2) and CR4. The strong inhibitory potential of these CR4 mutants is characterized by a particular phenotype. The DN effect of the small insertion mutations in CR2 was too weak to analyze (M. Popa, Z. Ruzsics, M. Lötzerich, L. Dölken, C. Buser, P. Walther, and U. H. Koszinowski, J. Virol. 84:9035-9046, 2010); therefore, the present study describes the construction of M53 alleles lacking CR2 (either completely or partially) and subsequent examination of the DN effect on MCMV replication upon conditional expression. Overexpression of CR2-deficient pM53 inhibited virus production by about 10,000-fold. This was due to interference with capsid export from the nucleus and viral genome cleavage/packaging. In addition, the fate of the nuclear envelopment complex in the presence of DN pM53 overexpression was analyzed. The CR2 mutants were able to bind to pM50, albeit to a lesser extent than the wild-type protein, and relocalized the wild-type nuclear envelope complex in infected cells. Unlike the CR4 DN, the CR2 DN mutants did not affect the stability of pM50.