骨格筋細胞および組織の細胞内分画のための簡単なプロトコル

背景：核、サイトゾル、ミトコンドリアの区画の比較的純粋な画分を得るためのマウス骨格筋、筋芽細胞、筋管の細胞内分画の方法について説明します。分別により、その細胞内コンパートメント分布に基づいて目的（または他の細胞成分）のタンパク質の分析が可能になり、細胞および/または組織の状態に関する分子情報、およびタンパク質の分布が異なる細胞コンパートメント間でどのように異なるかについても生成できます。、治療または老化に応じて、組織または細胞タイプ。 調査結果：説明された方法は、骨格筋と増殖/分化筋肉細胞のために特別に開発されました。細胞質、ミトコンドリア、核の細胞内コンパートメントを表す異なる画分の純度は、各細胞コンパートメントに特異的な「ハウスキーパー」マーカータンパク質のウエスタンブロット分析によって検証されました。 結論：この低コストの方法により、同じ開始筋肉サンプルからのミトコンドリア、細胞質、および核細胞内コンパートメントは、純度が良好で、超遠心性を使用せずに迅速かつ同時に分離されました。この方法により、将来の分析および/または追加の処理のために、サンプルを-80°Cで凍結することができます。

BACKGROUND: We describe a method for subcellular fractionation of mouse skeletal muscle, myoblast and myotubes to obtain relatively pure fractions of nuclear, cytosolic and mitochondrial compartments. Fractionation allows the analysis of a protein of interest (or other cellular component) based on its subcellular compartmental distribution and can also generate molecular information about the state of a cell and/or tissue and how the distribution of a protein may differ between different cellular compartments, tissues or cell types, in response to treatments or ageing. FINDINGS: The described method was specifically developed for skeletal muscle and proliferating/differentiated muscle cells. The purity of the different fractions, representing the cytoplasmic, mitochondrial and nuclear subcellular compartments was validated by western blot analysis of "house-keeper" marker proteins specific for each cellular compartment. CONCLUSION: This low cost method allowed the mitochondrial, cytoplasmic and nuclear subcellular compartments from the same starting muscle samples to be rapidly and simultaneously isolated with good purity and without the use of an ultracentrifuge. This method permits samples to be frozen at -80°C for future analysis and/or additional processing at a later date.