フルオレセイン標識ヒアルロン酸と蛍光相関分光法を使用したヒアルロニダーゼ活性の検出分光法

ヒアルロニダーゼの過剰発現は、多くの種類の癌で観察されており、診断の有用性がある可能性があることを示唆しています。ここでは、蛍光相関分光法（FCS）を使用したヒアルロニダーゼの検出のための手法を提示します。ヒアルロンの高分子（HAS）は、フルオレセインアミンで重く標識されており、自己消光をもたらしています。ヒアルロニダーゼの存在下で、HAはより小さなフルオレセイン標識断片に切断され、自己消光が放出されます。このような切断は、HAフラグメントの平均拡散速度の増加、個々の濃度の増加、蛍光HAフラグメント、および強度の増加によって明らかになります。これらの3つの特性はすべて、時間の関数とヒアルロニダーゼ濃度の両方として、FCS測定全体で同時に監視されます。私たちが提示する方法は、ヒアルロニダーゼ活性の敏感な尺度を提供し、非常に少量のHA基質が必要です。

The over-expression of hyaluronidase has been observed in many types of cancer, suggesting that it may have utility for diagnosis. Here we present a technique for the detection of hyaluronidase using Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS). Hyaluronan macromolecules (HAs) have been heavily labeled with fluorescein amine resulting in strong self-quenching. In the presence of hyaluronidase, HA is cleaved into smaller, fluorescein-labeled fragments and the self-quenching is released. Such cleavage is manifested by the increased average diffusion rate of the HA fragments, increased concentration of individual, fluorescent HA fragments, and increased intensity. All three of these properties are monitored simultaneously throughout FCS measurements, both as a function of time and hyaluronidase concentration. The method we present provides a sensitive measure of hyaluronidase activity and requires extremely small amounts of the HA substrate.