初期のBリンパ球の発達のシングルセル分析は、in vivoにおける系統の仕様とコミットメントの独立した調節を示唆しています

B-リンパ球系統制限のプロセスをよりよく理解するために、PAX-5欠損動物からの初期のB lineage細胞の分子および機能的特性をB線症制限レポーターマウスに調査し、B線症を識別できるようにしました。- 従来の表面マーカーとは無関係に指定された前駆細胞。PAX-5欠乏により、λ5（Igll1）プロモーター制御レポーター遺伝子の発現によって特徴付けられた指定された前駆細胞B細胞の頻度が劇的に増加しました。ex vivo分離前駆細胞の遺伝子発現分析により、PAX-5欠乏がB細胞仕様にわずかな影響を与えることが明らかになりました。しかし、ex in vivo分離細胞の単一細胞内in vitro分化分析により、特定されたB lineage前駆細胞が、NKまたはT系統細胞への発達のための高度な可塑性を依然として示していることが明らかになりました。対照的に、特定のPAX-5欠損細胞の骨髄性系統の可能性の大きな変化を検出することはできませんでした。ex vivo分離PAX-5およびEBF-1欠損前駆細胞における遺伝子発現パターンを比較することにより、PAX-5ではなくEBF-1に依存するB細胞制限遺伝子のセットを特定することができました。そのB細胞の仕様とコミットメントは、異なる規制ネットワークによって制御されます。

To better understand the process of B-lymphocyte lineage restriction, we have investigated molecular and functional properties in early B-lineage cells from Pax-5-deficient animals crossed to a B-lineage-restricted reporter mouse, allowing us to identify B-lineage-specified progenitors independently of conventional surface markers. Pax-5 deficiency resulted in a dramatic increase in the frequency of specified progenitor B-cells marked by expression of a λ5 (Igll1) promoter-controlled reporter gene. Gene expression analysis of ex vivo isolated progenitor cells revealed that Pax-5 deficiency has a minor impact on B-cell specification. However, single-cell in vitro differentiation analysis of ex vivo isolated cells revealed that specified B-lineage progenitors still displayed a high degree of plasticity for development into NK or T lineage cells. In contrast, we were unable to detect any major changes in myeloid lineage potential in specified Pax-5-deficient cells. By comparison of gene expression patterns in ex vivo isolated Pax-5- and Ebf-1-deficient progenitors, it was possible to identify a set of B-cell-restricted genes dependent on Ebf-1 but not Pax-5, supporting the idea that B-cell specification and commitment is controlled by distinct regulatory networks.