FCγ受容体の活性化を引き起こすウイルス特異的抗体を検出するための新しいアッセイ

IgG 応答は抗ウイルス防御に重要であり、感染症の血清診断に役立ちます。IgG の Fc 部分を認識する Fcγ 受容体 (FcγR) は、IgG 結合親和性、IgG サブクラスの優先性、細胞発現プロファイル、および活性化時に誘発される病原体排除機構に関して異なります。in vitro での活性化を評価することは基本的に重要ですが、技術的には困難です。したがって、個々の宿主 Fcγ 受容体の活性化を引き起こす抗ウイルス IgG 抗体を測定するための新しいアッセイが確立されました。このアッセイは、ウイルスに感染した標的細胞と免疫 IgG 抗体、およびヒト FcγRIIIA、FcγRIIA、または FcγRI の細胞外ドメインからそれぞれ膜貫通および融合されたキメラ FcγR-CD3ζ 鎖分子を安定して発現するマウス BW5147 ハイブリドーマ細胞との共培養を含みます。マウス CD3ζ 鎖の細胞内ドメイン。IgG オプソニン化ウイルス感染標的細胞の表面に形成された免疫複合体によるキメラ FcγR 受容体の誘発により、FcγR が活性化され、BW5147 細胞による IL-2 分泌が引き起こされ、ELISA で代理マーカーとして定量されました。単純ヘルペスウイルス 1 型 (HSV-1)、エプスタイン・バーウイルス (EBV)、ヒトサイトメガロウイルス (HCMV)、麻疹ウイルス (MV)、呼吸器合胞体ウイルス (RSV) などのさまざまなヒト病原性ウイルスに感染した細胞、またはヒトを提示する細胞を標的とします。免疫不全ウイルス 1 (HIV-1) gp120 は用量依存的な IgG 応答を引き起こし、このアッセイの普遍的な適用可能性を示しています。総合すると、Fcγ 受容体の活性化を引き起こす抗体を測定するための、信頼性が高く簡単な新しいツールが確立されました。このアッセイは、IgG 免疫の新しい相関関係を定義し、新しい治療用 IgG を設計するのに役立ちます。

IgG responses are crucial in antiviral defence and instrumental for the serodiagnosis of infections. Fcγ receptors (FcγRs), which recognize the Fc-part of IgG, differ regarding their IgG binding affinity, IgG subclass preference, cellular expression profile and pathogen elimination mechanisms elicited upon activation. Assessing their activation in vitro is of fundamental importance, but technically difficult. Therefore, a novel assay for measuring antiviral IgG antibodies triggering activation of individual host Fcγ receptors was established. The assay comprises the co-cultivation of virus-infected target cells with immune IgG antibodies and mouse BW5147 hybridoma cells stably expressing chimeric FcγR-CD3ζ chain molecules consisting of the extracellular domain of human FcγRIIIA, FcγRIIA or FcγRI, respectively, fused to the transmembrane and intracellular domains of the mouse CD3ζ chain. Triggering of the chimeric FcγR receptors by immune complexes formed on the surface of IgG-opsonized virus-infected target cells resulted in FcγR activation leading to IL-2 secretion by BW5147 cells, which was quantified as a surrogate marker in an ELISA. Target cells infected with various human pathogenic viruses including herpes simplex virus type 1 (HSV-1), Epstein-Barr virus (EBV), human cytomegalovirus (HCMV), measles virus (MV), and respiratory syncytial virus (RSV) or displaying human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) gp120 evoke dose-dependent IgG responses demonstrating the universal applicability of the assay. Taken together, a new reliable and simple tool for measuring antibodies triggering activation of Fcγ receptors was established. This assay will be instrumental for defining novel correlates of IgG immunity and the design of new therapeutic IgGs.