in vivoダイナミクスと細胞内構造の超微細構造で研究するためのツールとしての相関光電子顕微鏡検査

相関光電子顕微鏡（CLEM）は、動的な細胞内オルガネラの超微細構造形態学的特性評価のためのライブセルイメージングと免疫電子顕微鏡を組み合わせた非常に効果的な手法です。緑色の蛍光タンパク質（GFP）のタグ付きキメラを使用すると、ユーザーはライブセル内の細胞内構造の動きおよび/または挙動を追跡し、関心のある瞬間に修正することができます。その後の免疫電子顕微鏡検査は、GFP標識タンパク質の正確な認識とともに、同じ構造の3次元アーキテクチャを明らかにすることができます。このプロセスは、興味深いライブシーンの高解像度のスナップショットの取得に似ています。クレムは非常に便利ですが、技術的には要求が厳しく、時間のかかるテクニックであることを考慮すると、正確なプロトコルは、この方法を自分の目的に合わせて喜んで適用する科学者の仕事を簡素化するのに役立ちます。ここでは、クレム実験の重要なステップの実行に関与するすべての「トリック」とノウハウを説明する詳細なプロトコルを提示します。

Correlative light-electron microscopy (CLEM) is a very effective technique that combines live-cell imaging and immuno-electron microscopy for ultrastructural morphological characterization of dynamic intracellular organelles. The use of green fluorescent protein (GFP)-tagged chimeras allows the user to follow the movements and/or behavior of intracellular structures in a live cell and to fix it at the moment of interest. The subsequent immuno-electron microscopy processing can then reveal the three-dimensional architecture of the same structure, together with precise recognition of the GFP-labeled protein. The process resembles the taking of a high-resolution snapshot of an interesting live scene. Considering that CLEM is a very useful but technically demanding and time-consuming technique, accurate protocols will be helpful to simplify the work of scientists who are willing to apply this method for their own purposes. Here, we present a detailed protocol that describes all of the "tricks" and know-hows involved in carrying out the crucial steps of a CLEM experiment.