エンドサイトーシス経路の電子顕微鏡

エンドサイトーシス系の複雑で動的なコンパートメントの微細な構造と3Dアーキテクチャに関する詳細な洞察は、細胞表面から異なる細胞内目的地までの逆行トラフィックの形態系分析に不可欠です。ここでは、高圧凍結による細胞の非常に高速な物理固定と組み合わせて、小麦胚細胞（WGA）を使用した小麦胚細胞（WGA）を使用したエンドサイトーシス経路の電子顕微鏡探索のための細胞化学的アプローチについて説明します。ヒト肝腫細胞によってさまざまな期間にわたってマーカーとして機能した西洋ワラディッシュペルオキシダーゼ標識WGAエンドシトズ化されました。その細胞内路は、化学的固定後に従来行われるか、物理的固定の前に生細胞で行われたジアミノベンジジン酸化によって視覚化されました。後者のプロトコルは、高空間的および時間的解像度での複雑で動的なオルガネラの超微細構造研究のARTである高圧凍結（HPF）とのペルオキシダーゼ触媒化学化学化学（HPF）の組み合わせを可能にします。この技術は、異なるソミクル化学反応と、複雑なエンドサイトーシスアーキテクチャの詳細な電子顕微鏡および3D研究に適した優れた保存された微細構造を生成します。

Detailed insight into the fine structure and 3D-architecture of the complex and dynamic compartments of the endocytic system is essential for a morpho-functional analysis of retrograde traffic from the cell surface to different intracellular destinations. Here, we describe a cytochemical approach for electron microscopic exploration of endocytic pathways with the use of wheat germ agglutinin (WGA) in combination with either conventional chemical fixation or ultrafast physical fixation of the cells by high pressure-freezing. Horseradish peroxidase-labeled WGA endocytozed by human hepatoma cells for various periods of time served as a marker. Its intracellular routes were visualized by means of diaminobenzidine oxidation either done conventionally after chemical fixation or in living cells prior to physical fixation. The latter protocol permits the combination of peroxidase-catalyzed cytochemistry with high pressure-freezing (HPF), which is state of the art for ultrastructural studies of complex and dynamic organelles at high spatial and temporal resolutions. The technique yields distinct cytochemical reactions and excellently preserved fine structures well qualified for detailed electron microscopic and 3D-studies of the complex endocytic architectures.