ピットストップ2は、クラスリン非依存性エンドサイトーシスの強力な阻害剤です

クラスリン独立エンドサイトーシス（CIE）は、栄養素、高分子、膜タンパク質の侵入を細胞に媒介するすべての細胞に存在するエンドサイトーシスの一種です。しかし、クラスリン依存性エンドサイトーシス（CDE）と比較すると、CIEエンドソームの形成に関与する機械についてはあまり知られていません。CIEとCDEを区別する1つの方法は、クラスリンやダイナミンGTPaseなどのCDEに関与するコートタンパク質の細胞を枯渇させ、CIEではなくCDEのブロックにつながることです。このような遺伝的操作の欠点は、数日間にわたってCDEを媒介するために重要なタンパク質の枯渇が、細胞機能に複雑な間接的な影響を与える可能性があることです。CDEまたはCIEを特異的かつ迅速にブロックする化合物の識別は、プロセスがCDEまたはCIEに関係するかどうかの決定を促進します。これまで、これらの化合物はすべてCDEを標的としています。DynasoreとDynolesは、Dynaminアクティビティを特異的に標的とブロックするため、CDEを阻害しますが、ほとんどの形態のCIEは阻害されません。最近、ピットストップ2と呼ばれる新しい化合物が、両親媒性物とクラスリンのアミノ末端ドメインとの相互作用の阻害剤として特定され、細胞内のCDEを阻害することが示されました。ここでは、PitStop 2がCIEの強力な阻害剤でもあることを示します。クラスリンのノックダウンが薬物によるCIEタンパク質のエンドサイトーシスの阻害を救うことができないため、ピットストップ2の効果はクラスリンの阻害に限定されません。したがって、ピットストップ2には、クラスリンのアミノ末端ドメイン以外に追加の細胞ターゲットがあるため、CIEとCDEを区別するために使用することはできません。

Clathrin independent endocytosis (CIE) is a form of endocytosis present in all cells that mediates the entry of nutrients, macromolecules and membrane proteins into cells. When compared to clathrin-dependent endocytosis (CDE), however, much less is known about the machinery involved in forming CIE endosomes. One way to distinguish CIE from CDE has been to deplete cells of coat proteins involved in CDE such as clathrin or the dynamin GTPase, leading to a block of CDE but not CIE. A drawback of such genetic manipulations is that depletion of proteins important for mediating CDE over a period of days can have complex indirect effects on cellular function. The identification of chemical compounds that specifically and rapidly block CDE or CIE would facilitate the determination of whether a process involved CDE or CIE. To date, all of those compounds have targeted CDE. Dynasore and the dynoles specifically target and block dynamin activity thus inhibiting CDE but not most forms of CIE. Recently, a new compound called pitstop 2 was identified as an inhibitor of the interaction of amphiphysin with the amino terminal domain of clathrin, and shown to inhibit CDE in cells. Here we show that pitstop 2 is also a potent inhibitor of CIE. The effects of pitstop 2 are not restricted to inhibition of clathrin since knockdown of clathrin fails to rescue the inhibition of endocytosis of CIE proteins by the drug. Thus pitstop 2 has additional cellular targets besides the amino terminal domain of clathrin and thus cannot be used to distinguish CIE from CDE.