システインS結合βリアーゼ活性を測定する方法

システインコンジュゲートβリアーゼは、さまざまな組織における少なくとも11枚のピリドキサール5'-リン酸（PLP）依存性酵素によって触媒される細胞質およびミトコンドリアの活性を表します。これらの酵素は、いくつかのハロアルカンとハロールケンのシステインS結合体の生物活性化を媒介します。反応は、直接的なβ除去または転移のいずれかを介して発生し、それに続くレトロマイケルの再配置が行われ、C-S結合が切断されます。結果として生成される生成物は、チオアシル化種を形成するために再配置する反応性チオレートです。このユニットは、βリアーゼ活性のアッセイのためのいくつかのプロトコルを提示し、蛍光活性の汚れだけでなく、製品の形成と基質損失の測定値を含んでいます。サポートプロトコルは、選択されたシステインS結合の合成および高性能液クロマトグラフィ分析を説明しています。β-リアーゼ反応を触媒できる酵素の多様性のため、ここに提示される各アッセイは、特定の生物学的調製における潜在的なβ-リアーゼ活性の一部のみを示している可能性があります。

The cysteine conjugate β-lyase represents activities in cytoplasm and mitochondria catalyzed by at least eleven pyridoxal 5'-phosphate (PLP)-dependent enzymes in various tissues. These enzymes mediate bioactivation of cysteine S-conjugates of several haloalkanes and haloalkenes. The reaction occurs through either a direct β-elimination or a transamination followed by a retro-Michael rearrangement, resulting in the cleavage of a C-S bond. The resultant product is a reactive thiolate that rearranges to form thioacylating species. This unit presents several protocols for the assay of β-lyase activity and includes measurements of product formation and substrate loss as well as fluorescent activity stains. Support protocols describe the synthesis and high-performance liquid chromatography analysis of selected cysteine S-conjugates. Because of the diversity of enzymes that can catalyze a β-lyase reaction, each of the assays presented here may indicate only a portion of the potential β-lyase activity in a given biological preparation.