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目的：ストレプトアビジンタグ付きヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（SA/HGM-CSF）融合タンパク質を得て、その生物活性を評価します。 方法：PET24A-6HIS-SA-L-HGM-CSFおよびPET24A-HGM-CSF-L-SA-6HISプラスミドを構築し、Rosetta（DE3）宿主細菌で発現して融合タンパク質を生成しました。2つの融合タンパク質は、NI-NTAアフィニティクロマトグラフィー後の勾配透析により再溶け、最終的にDEAE-セファロースFFアニオン交換クロマトグラフィーを使用して精製しました。MTT法を使用して、ヒト赤血球血症細胞（TF-1）の増殖を誘導する際のSA/HGM-CSF融合タンパク質の効果を評価しました。ビオチン化MB49腫瘍細胞の表面修飾のための融合タンパク質の効率は、フローサイトメトリーによって評価されました。 結果：組換え融合タンパク質SA-HGM-CSFおよびHGM-CSF-SAは、総細菌タンパク質の約20％でロゼッタ（DE3）で高度に発現し、精製後に純度は約96％でした。2つの融合タンパク質は、ヒト赤半血症細胞（TF-1）とビオチン化細胞表面へのSAを介した高親和性結合（約99％の固定速度）に対するプロフィクション効果の二機能活性を示しました。 結論：この研究で得られたSA/HGM-CSF Bi融合タンパク質は、HGM-CSFによる表面修飾を伴うがん細胞ワクチンの開発の基礎となります。
目的：ストレプトアビジンタグ付きヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（SA/HGM-CSF）融合タンパク質を得て、その生物活性を評価します。 方法：PET24A-6HIS-SA-L-HGM-CSFおよびPET24A-HGM-CSF-L-SA-6HISプラスミドを構築し、Rosetta（DE3）宿主細菌で発現して融合タンパク質を生成しました。2つの融合タンパク質は、NI-NTAアフィニティクロマトグラフィー後の勾配透析により再溶け、最終的にDEAE-セファロースFFアニオン交換クロマトグラフィーを使用して精製しました。MTT法を使用して、ヒト赤血球血症細胞（TF-1）の増殖を誘導する際のSA/HGM-CSF融合タンパク質の効果を評価しました。ビオチン化MB49腫瘍細胞の表面修飾のための融合タンパク質の効率は、フローサイトメトリーによって評価されました。 結果：組換え融合タンパク質SA-HGM-CSFおよびHGM-CSF-SAは、総細菌タンパク質の約20％でロゼッタ（DE3）で高度に発現し、精製後に純度は約96％でした。2つの融合タンパク質は、ヒト赤半血症細胞（TF-1）とビオチン化細胞表面へのSAを介した高親和性結合（約99％の固定速度）に対するプロフィクション効果の二機能活性を示しました。 結論：この研究で得られたSA/HGM-CSF Bi融合タンパク質は、HGM-CSFによる表面修飾を伴うがん細胞ワクチンの開発の基礎となります。
OBJECTIVE: To obtain streptavidin-tagged human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (SA/hGM-CSF) fusion protein and evaluate its bioactivity . METHODS: PET24a-6His-SA-L-hGM-CSF and PET24a-hGM-CSF-L-SA-6His plasmids were constructed and expressed in Rosetta (DE3) host bacteria to generate the fusion proteins. The two fusion proteins were refolded by gradient dialysis after Ni-NTA affinity chromatography and finally purified using DEAE-sepharose FF anion exchange chromatography. MTT method was used to evaluate the effect of SA/hGM-CSF fusion proteins in inducing the proliferation of human erythroleukemia cells (TF-1). The efficiency of the fusion proteins for surface modification of biotinylated MB49 tumor cells was evaluated by flow cytometry. RESULTS: The recombinant fusion proteins SA-hGM-CSF and hGM-CSF-SA were highly expressed in Rosetta (DE3) at about 20% of the total bacterial proteins, with a purity of about 96% after purification. The two fusion proteins exhibited bifunctional activities, namely the pro-proliferation effect on human erythroleukemia cells (TF-1) and SA-mediated high-affinity binding to biotinylated cell surfaces (with an anchoring modified rate of about 99%). CONCLUSION: SA/hGM-CSF bi-fusion proteins obtained in this study lays the groundwork for the development of cancer cell vaccines with surface modification by hGM-CSF.
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