ヒト顎骨膜細胞からの骨形成剤の分離：2つの磁気分離法の比較

ヒト顎周囲組織には、口腔および顎顔面の手術における組織工学アプリケーションの可能性がある骨前腫瘍が含まれています。不均一な細胞集団から骨形成細胞を分離するために、特定の間葉系幹細胞抗原-1（MSCA-1）抗体を使用し、2つの磁気分離法を比較しました。得られたMSCA-1（+）およびMSCA-1（ - ）画分を、純度、陽性/陰性細胞の収率、および増殖および石灰化ポテンシャルの点で分析しました。分離後の細胞生存率の分析により、EasySepメソッドがより高い生存率速度をもたらすことが明らかになりましたが、フローサイトメトリーの結果はMACS分離された細胞画分のより高い純度を示しました。MACSを使用したMSCA-1（ - ）コントロールと比較した骨形成誘導MSCA-1（+）細胞の鉱化能力は5倍高かったのに対し、EasySep後の同じ比較では、両方の画分間に有意差は示されませんでした。細胞の増殖を分析することにより、MACS後の未処理細胞とEasySep分離後の骨形成細胞の増殖能と非治療細胞の間に有意差を検出しました。MACS分離後の分化した細胞は増殖能力を調整しましたが、EasySep分離された細胞はそうすることができませんでした。タンパク質発現分析は、2つの分離方法の間に小さな違いを示しました。我々の調査結果は、MACが顎骨周囲細胞集団全体から脱骨源を分離するためのより適切な分離方法であることを示唆しています。

Human jaw periosteum tissue contains osteoprogenitors that have potential for tissue engineering applications in oral and maxillofacial surgeries. To isolate osteoprogenitor cells from heterogeneous cell populations, we used the specific mesenchymal stem cell antigen-1 (MSCA-1) antibody and compared two magnetic separation methods. We analyzed the obtained MSCA-1(+) and MSCA-1(-) fractions in terms of purity, yield of positive/negative cells and proliferative and mineralization potentials. The analysis of cell viability after separation revealed that the EasySep method yielded higher viability rates, whereas the flow cytometry results showed a higher purity for the MACS-separated cell fractions. The mineralization capacity of the osteogenic induced MSCA-1(+) cells compared with the MSCA-1(-) controls using MACS was 5-fold higher, whereas the same comparison after EasySep showed no significant differences between both fractions. By analyzing cell proliferation, we detected a significant difference between the proliferative potential of the osteogenic cells versus untreated cells after the MACS and EasySep separations. The differentiated cells after MACS separation adjusted their proliferative capacity, whereas the EasySep-separated cells failed to do so. The protein expression analysis showed small differences between the two separation methods. Our findings suggest that MACS is a more suitable separation method to isolate osteoprogenitors from the entire jaw periosteal cell population.