3,5-ジニトロサリシル酸アッセイによる還元糖の定量化に対するアミノ酸干渉誤解を招く炭水化物活性測定

この研究では、アミノ酸トリプトファン、システイン、ヒスチジン、チロシン、ヒドロキシプロリン、ロイシン、プロリン、セリン、グリシン、バリン、グルタミン酸、フェニルアラニン、メチオニンの干渉を評価しました。- ジニトロサリチル酸（DNS）試薬。トリプトファン、システイン、ヒスチジン、チロシン、またはヒドロキシプロリンの20mmを含む反応混合物では、3.7 mMグルコースの測定がそれぞれ76％、50％、35％、18％、および10％を過大評価していることがわかりました。アミノ酸バリン、グルタミン酸、フェニルアラニンはDNS反応に影響を与えませんでしたが、メチオニンは色の発達を5％減少させました。20 mMシステインの存在下で3.7-12.4 mmの範囲でのグルコース、キシロース、アラビノース、およびセロビオースの測定により、34.8-50％の過大評価が発生しました。キシラ分解および濾紙活性（FPase）を測定するための酵素アッセイは、20〜60 mMのシステインの存在下で行われ、システインを含まないアッセイと比較しました。システインの存在下では、測定されたキシラナーゼ活性は3倍に増加し、アッセイ中の糖濃度の減少の過大評価のためにFPase活性が2倍に増加しました。システインからの干渉は、フェノールを含むDNS試薬を使用した場合、最大8.6％に減少しました。

This study evaluated the interference of the amino acids tryptophan, cysteine, histidine, tyrosine, hydroxyproline, leucine, proline, serine, glycine, valine, glutamic acid, phenylalanine, and methionine on the measurement of reducing sugars using a phenol-free 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) reagent. It was found that in reaction mixtures containing 20mM of either tryptophan, cysteine, histidine, tyrosine, or hydroxyproline the measurement of 3.7 mM glucose was overestimated by 76%, 50%, 35%, 18%, and 10%, respectively. The amino acids valine, glutamic acid, and phenylalanine did not affect the DNS reaction, while methionine decreased the color development by 5%. The measurement of glucose, xylose, arabinose, and cellobiose at the 3.7-12.4 mM range in the presence of 20 mM cysteine resulted in an overestimated concentration of 34.8-50%. Enzymatic assays for measuring xylanolytic and filter paper activity (FPAse) were conducted in the presence of 20-60 mM cysteine, and compared to cysteine-free assays. In the presence of cysteine, the measured xylanase activity increased threefold and the FPAse activity increased twofold due to the overestimation of the reducing sugar concentrations in the assays. The interference from cysteine was reduced to a maximum of 8.6% when a DNS reagent containing phenol was used.