リアルタイムPCR（QPCR）によるリシンとアブリンDNAの同時検出

リシンとアブリンは、既知の最も強力な植物毒素の2つであり、かなり単純な技術を使用して種子から高収量で簡単に得られる可能性があります。その結果、両方の毒素は強力であり、犯罪またはテロ行為のために利用可能な毒素です。ただし、高度に精製されたリシンまたはアブリンの生産には洗練された機器と知識が必要なため、非政府加害者が粗抽出物を使用する可能性が高くなる可能性があります。これらの抽出物の残りの植物特異的核酸は、アブリンまたはリシンゲノム材料の検出と同定のために、リアルタイムPCR（QPCR）アッセイを適用することができます。したがって、Omnimix HSビードPCR試薬混合物に基づいて、リシンとアブリンDNAを同時に検出するための二重リアルタイムPCRアッセイを開発しました。新しいプライマーとハイブリダイゼーションプローブは、5'-Nucleaseテクノロジーを使用してSmartCycler機器で検出するために設計されました。このアッセイは、分析感度の観点から徹底的に最適化され、検証されました。プロビット分析によるアッセイの感度の評価により、リシンDNAの反応ごとに3ゲノムで検出される95％の確率と、アブリンDNAの反応ごとに1.2ゲノムが示されました。アッセイの適合性は、食物マトリックス内のリシンとアブリン汚染の検出によって例示されました。

Ricin and abrin are two of the most potent plant toxins known and may be easily obtained in high yield from the seeds using rather simple technology. As a result, both toxins are potent and available toxins for criminal or terrorist acts. However, as the production of highly purified ricin or abrin requires sophisticated equipment and knowledge, it may be more likely that crude extracts would be used by non-governmental perpetrators. Remaining plant-specific nucleic acids in these extracts allow the application of a real-time PCR (qPCR) assay for the detection and identification of abrin or ricin genomic material. Therefore, we have developed a duplex real-time PCR assays for simultaneous detection of ricin and abrin DNA based on the OmniMix HS bead PCR reagent mixture. Novel primers and hybridization probes were designed for detection on a SmartCycler instrument by using 5'-nuclease technology. The assay was thoroughly optimized and validated in terms of analytical sensitivity. Evaluation of the assay sensitivity by probit analysis demonstrated a 95% probability of detection at 3 genomes per reaction for ricin DNA and 1.2 genomes per reaction for abrin DNA. The suitability of the assays was exemplified by detection of ricin and abrin contaminations in a food matrix.