このカードは、ASC焦点形成とインフラマソームシグナル伝達において重要な役割を果たしています

ASC（アポトーシススペック様タンパク質）は、炎症と宿主の防御を媒介する多量体タンパク質複合体の重要な成分です。PYD（Pyrin）ドメインとカード（カスパーゼ活性化およびリクルートメントドメイン）を含むASCは、ヌクレオチド結合ドメイン、ロイシンリッチリピート含有受容体）およびAIM2（メラノーマ2の欠席）の下流（ヌクレオチド結合ドメイン、ロイシンリッチリピート含有受容体）に機能します。インフラマソームと呼ばれる構造。ただし、ASCシグナル伝達の根底にあるメカニズムと、インフラマソーム形成におけるオリゴマーの配置への依存性は、依然としてよく理解されていません。細胞で発現すると、ASCは、通常、セルごとに1つのスペックを使用して、個別の病巣（「スペック」と呼ばれる）を形成します。BIFC（二分子蛍光補完）システムを使用して、生細胞のASC焦点形成を調査および視覚化しました。ASCのカードは、ASCインフラマソームアセンブリで中心的な役割を果たしており、カスパーゼ1カードと併せて焦点を形成できる最小ユニットを表すことを実証しました。突然変異研究は、ASCカードの複数の表面と、ASC/カスパーゼ1病巣の形成を媒介するカスパーゼ1カードの2つの主要な領域を指しています。ASCカード変異体の病巣形成の欠如は、NLRP（NLRファミリー、PYDドメイン含有）3またはRAW264.7細胞再構成アッセイのAIM2アゴニストに応答したIL-1β（インターロイキン1β）処理の喪失と相関しています。同様に、サルモネラTyphimurium誘発NLRC4（NLRファミリーカードドメインを含むタンパク質4）の生産的な形成は、ASCカードを介したプラットフォーム形成に依存していることを示しています。したがって、本研究の結果は、ASCシグナル伝達プラットフォームの形成におけるカードの中心的な役割を示し、カード依存ネットワークの調査のための重要なツールを提供します。

The ASC (apoptosis speck-like protein) is a key component of multimeric protein complexes that mediate inflammation and host defence. Comprising a PYD (Pyrin) domain and a CARD (caspase activation and recruitment domain), ASC functions downstream of NLRs (nucleotide-binding domain, leucine-rich repeat-containing receptors) and AIM2 (absent in melanoma 2) through the formation of supramolecular structures termed inflammasomes. However, the mechanism underlying ASC signalling and its dependency on oligomeric arrangements in inflammasome formation remain poorly understood. When expressed in cells, ASC forms discrete foci (called 'specks') typically with one speck per cell. We employed a BiFC (bimolecular fluorescence complementation) system to investigate and visualize ASC foci formation in living cells. We demonstrated that the CARD of ASC plays a central role in ASC inflammasome assembly, representing the minimal unit capable of forming foci in conjunction with the caspase 1 CARD. Mutational studies point to multiple surfaces on the ASC CARD and two predominant areas on the caspase 1 CARD mediating the formation of ASC/caspase 1 foci. The lack of foci formation for ASC CARD mutants correlates with a loss of IL-1β (interleukin 1β) processing in response to NLRP (NLR family, PYD domain-containing) 3 or AIM2 agonists in RAW264.7 cell reconstitution assays. Analogously, we show that productive formation of the Salmonella typhimurium-induced NLRC4 (NLR family CARD domain-containing protein 4) inflammasome is dependent on ASC-CARD-mediated platform formation. Thus the results of the present study depict a central role of CARDs in the formation of ASC signalling platforms and provide an important tool for investigation of CARD-dependent networks.