末梢単核細胞におけるIL-17およびIL-23サイトカイン刺激によるグルココルチコイド受容体のアップレギュレーションとステロイド抵抗性誘導

目的：ほとんどの喘息患者は、定期的な治療で十分に制御された症状を抱えていますが、吸入および経口コルチコステロイドのより高い用量を必要とするものもあれば、まれな場合には反応に失敗するものもあります。これらの患者は、気道、sp、末梢血にTH-17細胞浸潤と関連するサイトカイン（IL-17Aおよび-F）を提示する場合があります。グルココルチコイド受容体ベータ（GR-BETA）はコルチコステロイド耐性に関連しているため、TH-17関連サイトカインがGR-BETAのアップレギュレーションを介してPBMCのステロイド非感受性を誘導するかどうかを調査しました。 方法：GR-2/IL-4、IL-17A/IL-17F、およびIL-23サイトカインで定量的RT-PCRにより刺激されたPBMCで、GR-ALPHA、GR-BETA、GILZ、およびIL-6発現を分析しました。PHA誘発性増殖およびデキサメタゾン誘発アポトーシスのデキサメタゾン阻害は、（3）H-チミジンまたはCFSE標識細胞のいずれか、およびアネキシン-V染色およびフローサイトメトリーによって決定されました。 結果：IL-17およびIL-23サイトカインは、GR-BETA発現を有意に増加させました。IL-2/IL-4は、GR-BETAに影響を与えることなくGR-α発現を大幅に減少させました。IL17、IL-23およびIL2+4刺激により、増殖のデキサメタゾン阻害が有意に妨げられました（DEX EC（50）：IL-17A+F = 251 nm; IL-23 = 435 nm; IL2+4 = 950 nm; Medium =90 nm）。IL2+4およびIL17A+FはIL-23ではなく、デキサメタゾン誘発アポトーシス（それぞれ1400および320 nm DEX）を著しく妨害しました。デキサメタゾンのGILZのトランス活性化とNF-KB駆動型のIL-6発現のトランス抑制は、両方ともIL2+4によって阻害されました。IL17+IL23喘息からのPBMCにおけるDexトランス抑制に拮抗した。 結論：IL-17/IL-23サイトカインによるGR-BETAのアップレギュレーションは、PBMCの誘導ステロイド非感受性と関連しており、細胞増殖、アポトーシス、遺伝子調節に対するデキサメタゾンの効果の低下として観察されます。IL-2/IL-4によって誘導されるステロイド耐性は、GR-α発現の減少と関連していた。この研究は、TH-17リンパ球と関連するサイトカインが、重度の喘息患者におけるステロイド低応答性のメカニズムに役割を果たす可能性をサポートしています。

PURPOSE: Most asthmatic patients have well controlled symptoms with regular treatment, but some require much higher doses of inhaled and oral corticosteroids, or in rare cases fail to respond; these patients may present Th-17 cell infiltration and associated cytokines (IL-17A and -F) in the airways, sputum and peripheral blood. Because glucocorticoid receptor-beta (GR-beta) is associated with corticosteroid resistance, we investigated whether Th-17 associated cytokines induce steroid insensitivity in PBMCs via GR-beta up-regulation. METHODS: GR-alpha, GR-beta, GILZ and IL-6 expression were analyzed in PBMCs stimulated with IL-2/IL-4, IL-17A/IL-17F and IL-23 cytokines by quantitative RT-PCR. Dexamethasone-inhibition of PHA-induced proliferation and Dexamethasone-induced apoptosis were determined by either (3)H-thymidine or CFSE-labelled cells and by Annexin-V staining and flow cytometry. RESULTS: IL-17 and IL-23 cytokines significantly increased GR-beta expression. IL-2/IL-4 significantly decreased GR-alpha expression without affecting GR-beta. IL17, IL-23 and IL2 + 4 stimulations significantly hampered Dexamethasone-inhibition of proliferation (Dex EC(50) for: IL-17A + F = 251 nM; IL-23 = 435 nM; IL2 + 4 = 950 nM; Medium = 90 nM). IL2 + 4 and IL17A + F but not IL-23, significantly hampered Dexamethasone-induced apoptosis (1400 and 320 nM Dex, respectively). Dexamethasone's trans-activation of GILZ and trans-repression of NF-kB-driven IL-6 expression were both inhibited by IL2 + 4; IL17 + IL23 antagonized Dex trans-repression in PBMC from asthmatics. CONCLUSIONS: GR-beta up-regulation by IL-17/IL-23 cytokines is associated with induced steroid insensitivity in PBMCs, observed as diminished Dexamethasone's effects on cell proliferation, apoptosis and gene regulation. Steroid resistance induced by IL-2/IL-4 was associated with decreased GR-alpha expression. This study supports the possibility that Th-17 lymphocytes and associated cytokines play a role in the mechanism of steroid hypo-responsiveness in severe asthmatics.