グルコース調節タンパク質78キロダルトンは、ラットの黄体化顆粒膜細胞における黄体形成ホルモン受容体発現のモジュレーターです

グルコース調節タンパク質、78キロダルトン（GRP78）は、小胞体に存在する分子シャペロンであり、タンパク質の集合、輸送、折りたたみに関与しています。以前は、GRP78はゴナドトロピン受容体と関連することが報告されていました。しかし、GRP78が黄体形成ホルモン受容体（LHR）の調節にどのように関与しているかについてはほとんど知られていない。したがって、この研究では、ラットの黄体化顆粒膜細胞におけるLHRの誘導に対するGRP78の重要性を調査しました。HEK293細胞で発現したラットLHRのウエスタンブロット分析により、GRP78タンパク質の増加に応じて、LHRのタンパク質レベルが増加したことが明らかになりました。in vivo実験とin vitro実験の両方で、GRP78 mRNAレベルはピークに達し、LHR mRNAはヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）によってダウンレギュレートされました。in vivoでのGRP78の時間依存の局在を調べるために、免疫組織化学を実施しました。GRP78は主に顆粒膜細胞で発現し、GRP78タンパク質は、馬の絨毛性ゴナドトロピン濃縮未成熟ラットのHCG注射の排卵量の18時間後にピークに達しました。ダウンレギュレーション後のLHRにおけるGRP78の役割を確認するために、小さな干渉GRP78を培養ラット顆粒膜細胞にトランスフェクトし、GRP78タンパク質レベルのノックダウンが、プロゲス剤合成に悪影響を与えるダウンレギュレーションからの細胞表面LHRの回復を損なうことを示しています。さらに、ルシフェラーゼアッセイは、CREがラット黄体化顆粒膜細胞におけるGRP78のHCG誘発性プロモーター活性を媒介することを示しました。これらの結果は、コーパスルストラム層の初期段階でのGRP78によるLHRの新しいメカニズムを明らかにしています。これは、ダウンレギュレーション後のLHRの回復における重要な要因である可能性があります。

Glucose-regulated protein, 78-kilodalton (GRP78) is a molecular chaperone that exists in the endoplasmic reticulum and is involved in the assembly, transportation, and folding of proteins. Previously, GRP78 was reported to associate with gonadotropin receptors. However, little is known about how GRP78 is involved in the regulation of luteinizing hormone receptor (LHR). Thus, in this study, we investigated the significance of GRP78 for the induction of LHR in rat luteinizing granulosa cells. Western blot analysis of rat LHR expressed in HEK293 cells revealed that the protein levels of LHR were increased, depending on the increment of GRP78 protein. In both in vivo and in vitro experiments, the GRP78 mRNA level peaked while LHR mRNA was down-regulated by human chorionic gonadotropin (hCG). To examine the time-dependent localization of GRP78 in vivo, immunohistochemistry was performed. GRP78 was expressed mainly in granulosa cells, and the GRP78 protein peaked 18 h after the ovulatory dose of hCG injection in equine chorionic gonadotropin-primed immature rats. To ascertain the role of GRP78 in LHR after down-regulation, small interfering GRP78 was transfected to cultured rat granulosa cells, demonstrating that knockdown of the GRP78 protein level impaired the recovery of cell surface LHR from down-regulation that negatively affected progesterone synthesis. Moreover, luciferase assays showed that CRE mediated the hCG-induced promoter activity of GRP78 in rat luteinizing granulosa cells. These results reveal a novel mechanism of LHR by GRP78 in the early stage of corpus lustrum formation, which may be an important factor in the recovery of LHR after the down-regulation.