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Free radical research2013Feb01Vol.47issue(2)

S-ニトロソチオールの定量化のためのロケット燃料メチルヒドラジンによるチオールへのs-ニトロソチオールの高度な還元

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

S-ニトロソチオールの対応するチオール関数への還元は、タンパク質のS-ニトロソシスタニル残基を分析する重要なステップです。低収量を得ることが示されていますが、アスコルビン酸依存性の減少は一般に頻繁に使用されるビオチンスイッチ技術で実行されます。化合物メチルヒドラジンは、S-ニトロソチオールの特異的かつ効率的な還元剤として作用できることを実証します。対応するチオール関数は、低分子量とタンパク質のS-ニトロソチオールからのみ生成されますが、メチルヒドラジンはジスルフィドを減少させることができませんでした。チオールの自己酸化が除外されるように実験条件を最適化することが可能であり、チオール関数で高い反応収率(> 90%)が得られます。メチルヒドラジン依存性の還元で実行されるビオチンスイッチ技術は、アスコルビン酸依存性の手順と比較して感度が著しく改善されたことを示しています。

S-ニトロソチオールの対応するチオール関数への還元は、タンパク質のS-ニトロソシスタニル残基を分析する重要なステップです。低収量を得ることが示されていますが、アスコルビン酸依存性の減少は一般に頻繁に使用されるビオチンスイッチ技術で実行されます。化合物メチルヒドラジンは、S-ニトロソチオールの特異的かつ効率的な還元剤として作用できることを実証します。対応するチオール関数は、低分子量とタンパク質のS-ニトロソチオールからのみ生成されますが、メチルヒドラジンはジスルフィドを減少させることができませんでした。チオールの自己酸化が除外されるように実験条件を最適化することが可能であり、チオール関数で高い反応収率(> 90%)が得られます。メチルヒドラジン依存性の還元で実行されるビオチンスイッチ技術は、アスコルビン酸依存性の手順と比較して感度が著しく改善されたことを示しています。

Reduction of S-nitrosothiols to the corresponding thiol function is the key step in analyzing S-nitrosocysteinyl residues in proteins. Though it has been shown to give low yields, ascorbate-dependent reduction is commonly performed in the frequently used biotin-switch technique. We demonstrate that the compound methylhydrazine can act as a specific and efficient reducing agent for S-nitrosothiols. The corresponding thiol function is exclusively generated from low molecular weight and proteinaceous S-nitrosothiols while methylhydrazine failed to reduce disulfides. It was possible to optimize the experimental conditions so that thiol autoxidation is excluded, and high reaction yields (>90%) are obtained for the thiol function. The biotin-switch technique performed with methylhydrazine-dependent reduction shows remarkably improved sensitivity compared to the ascorbate-dependent procedure.

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