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背景：トランスフェリン（TF）は、ほぼすべての真核生物におけるトランスフェリン受容体（TFR）を介したエンドサイトーシス経路を介して、細胞鉄の送達において重要な生理学的役割を果たします。ヒト血清TF（HTF）は、治療タンパク質の生産のためにさまざまな哺乳類細胞培養の鉄消費媒体として広く使用されており、そのユニークなTFR媒介性を採用することにより、多くの疾患を治療するための薬物担体として使用するためにも調査されています。エンドサイトーシス経路。ヒト血漿由来TFの感染性病原体の伝播のリスクに対する懸念が高まっているため、これらのアプリケーションに使用することが好まれています。ここでは、TFR結合、TFRを介したエンドサイトーシス、およびイネからの組換えHTFの細胞鉄の送達の比較研究を実施し、バイオ医薬品アプリケーションへの適合性を評価します。 結果：HELAヒト子宮頸癌細胞（CCL-2）およびCACO-2ヒト結腸癌細胞（HTB-37）を使用したTFR競合結合親和性アッセイを通じて、RHTFはHTFと同様にTFRと同様に競合することを示し、TFRの両方がTFRを結合します。RHTFの結合能力と解離定数は、HTFの容量と同等です。エンドサイトーシスアッセイは、腸細胞様CACO-2細胞のゆっくりとした蓄積においてRHTFがHTFと同様に行動することを確認し、HELA細胞の急速なリサイクル経路を確認します。CACO-2およびHELA細胞におけるRHTFのパルスチェースアッセイは、HTFと比較して、イネ由来RHTFが同様のエンドサイトーシスと細胞内処理を持っていることをさらに示しています。細胞培養アッセイは、RHTFが2つの多様な哺乳類細胞株への鉄の送達におけるHTFに機能的に類似していることを示しています。抗体産生の増殖、分化、および生理学的機能をサポートするためのパートナー（HB-72）。 結論：細胞鉄の送達、TFR結合、およびTFRを介したエンドサイトーシスおよび細胞内処理サポートにおけるイネ由来RHTFとネイティブHTFの間の機能的類似性は、米由来のRHTFを安全で動物のない血清HTFの安全で動物のない代替品として使用できます。バイオプロセシングおよびバイオ医薬品アプリケーション。
背景：トランスフェリン（TF）は、ほぼすべての真核生物におけるトランスフェリン受容体（TFR）を介したエンドサイトーシス経路を介して、細胞鉄の送達において重要な生理学的役割を果たします。ヒト血清TF（HTF）は、治療タンパク質の生産のためにさまざまな哺乳類細胞培養の鉄消費媒体として広く使用されており、そのユニークなTFR媒介性を採用することにより、多くの疾患を治療するための薬物担体として使用するためにも調査されています。エンドサイトーシス経路。ヒト血漿由来TFの感染性病原体の伝播のリスクに対する懸念が高まっているため、これらのアプリケーションに使用することが好まれています。ここでは、TFR結合、TFRを介したエンドサイトーシス、およびイネからの組換えHTFの細胞鉄の送達の比較研究を実施し、バイオ医薬品アプリケーションへの適合性を評価します。 結果：HELAヒト子宮頸癌細胞（CCL-2）およびCACO-2ヒト結腸癌細胞（HTB-37）を使用したTFR競合結合親和性アッセイを通じて、RHTFはHTFと同様にTFRと同様に競合することを示し、TFRの両方がTFRを結合します。RHTFの結合能力と解離定数は、HTFの容量と同等です。エンドサイトーシスアッセイは、腸細胞様CACO-2細胞のゆっくりとした蓄積においてRHTFがHTFと同様に行動することを確認し、HELA細胞の急速なリサイクル経路を確認します。CACO-2およびHELA細胞におけるRHTFのパルスチェースアッセイは、HTFと比較して、イネ由来RHTFが同様のエンドサイトーシスと細胞内処理を持っていることをさらに示しています。細胞培養アッセイは、RHTFが2つの多様な哺乳類細胞株への鉄の送達におけるHTFに機能的に類似していることを示しています。抗体産生の増殖、分化、および生理学的機能をサポートするためのパートナー（HB-72）。 結論：細胞鉄の送達、TFR結合、およびTFRを介したエンドサイトーシスおよび細胞内処理サポートにおけるイネ由来RHTFとネイティブHTFの間の機能的類似性は、米由来のRHTFを安全で動物のない血清HTFの安全で動物のない代替品として使用できます。バイオプロセシングおよびバイオ医薬品アプリケーション。
BACKGROUND: Transferrin (TF) plays a critical physiological role in cellular iron delivery via the transferrin receptor (TFR)-mediated endocytosis pathway in nearly all eukaryotic organisms. Human serum TF (hTF) is extensively used as an iron-delivery vehicle in various mammalian cell cultures for production of therapeutic proteins, and is also being explored for use as a drug carrier to treat a number of diseases by employing its unique TFR-mediated endocytosis pathway. With the increasing concerns over the risk of transmission of infectious pathogenic agents of human plasma-derived TF, recombinant hTF is preferred to use for these applications. Here, we carry out comparative studies of the TFR binding, TFR-mediated endocytosis and cellular iron delivery of recombinant hTF from rice (rhTF), and evaluate its suitability for biopharmaceutical applications. RESULT: Through a TFR competition binding affinity assay with HeLa human cervic carcinoma cells (CCL-2) and Caco-2 human colon carcinoma cells (HTB-37), we show that rhTF competes similarly as hTF to bind TFR, and both the TFR binding capacity and dissociation constant of rhTF are comparable to that of hTF. The endocytosis assay confirms that rhTF behaves similarly as hTF in the slow accumulation in enterocyte-like Caco-2 cells and the rapid recycling pathway in HeLa cells. The pulse-chase assay of rhTF in Caco-2 and HeLa cells further illustrates that rice-derived rhTF possesses the similar endocytosis and intracellular processing compared to hTF. The cell culture assays show that rhTF is functionally similar to hTF in the delivery of iron to two diverse mammalian cell lines, HL-60 human promyelocytic leukemia cells (CCL-240) and murine hybridoma cells derived from a Sp2/0-Ag14 myeloma fusion partner (HB-72), for supporting their proliferation, differentiation, and physiological function of antibody production. CONCLUSION: The functional similarity between rice derived rhTF and native hTF in their cellular iron delivery, TFR binding, and TFR-mediated endocytosis and intracellular processing support that rice-derived rhTF can be used as a safe and animal-free alternative to serum hTF for bioprocessing and biopharmaceutical applications.
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