[がん幹細胞時代の強力な臨床検査としてのFACS-MQ]

幹細胞は多能性と自己更新であり、特定の組織のさまざまな細胞タイプに分化する能力を持っています。癌組織では、癌幹細胞（CSC）という名前の幹細胞との生物学的類似性を示す細胞の存在は、組織の成長を調節し、その予後を決定することが知られています。幹細胞とCSCは通常、組織内の細胞のわずかな集団として存在します。これらの細胞の検出と分析は、通常、従来のプロトコルを使用して蛍光活性化細胞並べ替え（FAC）を使用しても面倒です。これらの欠点を考慮して、FACS（FACS-MQ）にちなんでmRNA定量化という名前の新しい分析方法を開発しました。FACS-MQでは、細胞はRNAの分解を最小限に抑える方法で蛍光色素で標識され、その後、FACSによってソートされた細胞が遺伝子発現プロファイルを分析することにより調べられます。フローサイトメトリー分析のために臨床サンプルから単一細胞を取得するためのプロトコルを確立しました。さらに、蛍光標識抗体、CRNAプローブ、ロックされた核酸（LNA）プローブを使用してFACS-MQ分析を実行しました。免疫細胞化学を使用して、FACS-MQでは細胞内RNAの明らかな減少は観察されませんでした。CRNAプローブを使用したin situハイブリダイゼーション後、細胞内RNAの約60％が保存されました。少数の分類細胞からのこれらのRNAは、遺伝子発現プロファイルを確立するための定量分析に適していました。FACS-MQは、骨の折れる時間のかかる手順を必要としません。したがって、幹細胞または癌幹細胞に関する研究を促進することが期待されています。

Stem cells are pluripotent and self renewing, and possess an ability to differentiate into the various cell types of a particular tissue. In cancer tissues, existence of cells showing biological similarities with stem cells, named cancer stem cells (CSC), are known to regulate the growth of the tissue and determine its prognosis. Stem cells and CSCs usually exist as minor populations of cells in a tissue. Detection and analysis of these cells are usually laborious even using fluorescence activated cell sorting (FACS) with the conventional protocols. Considering these drawbacks, we developed a novel analytical method named mRNA quantification after FACS (FACS-mQ). In FACS-mQ, cells are labeled with a fluorescent dye in a manner that minimizes RNA degradation, then cells sorted by FACS are examined by analyzing their gene expression profile. We established protocols to obtain single cells from clinical samples for flow cytometry analysis. Further, we performed FACS-mQ analysis using fluorescence-labeled antibodies, cRNA probes and locked nucleic acid (LNA) probes. Evident decrease of intracellular RNAs did not observed in FACS-mQ using immunocytochemistry. Approximately 60% of intracellular RNA was preserved after in situ hybridization using cRNA probes. These RNAs from a small number of sorted cells were suitable for quantitative analysis to establish gene expression profiles. FACS-mQ does not require laborious and time-consuming procedures; thus, it is expected to facilitate research on stem cells or cancer stem cells.