HCMV感染細胞は、宿主ゲノムの修復を廃止しながら、ウイルスゲノムの効率的なヌクレオチド切除修復を維持しています

多くのウイルスは、感染後にさまざまなDNA損傷応答（DDR）をマウントおよび完了する宿主細胞の能力を破壊します。寛容な線維芽細胞のHCMV感染は、ウイルス沈着時および複製時に宿主DDRを活性化しますが、DDRは逮捕またはアポトーシスなしで不完全なままです。これは、損傷応答の分割と二重鎖切断修復コンポーネントの一部が原因であると考えています。可溶性タンパク質の抽出後、これらの成分の局在は3つのグループに分類されました。特にウイルス複製センター（RC）に関連付けられ、核形成全体に拡散し、RCSから除外されます。他の人は、細胞が感染後に外因的に導入された損傷を処理できないことを示しています。細胞が損傷を処理できないことは、RCS内の修復成分の微分関連と、ウイルスゲノムの潜在的に優先的な修復と宿主ゲノムの妥協的な修復によるものであると仮定しました。この仮説をテストするために、複数の戦略を使用して、模擬およびウイルスに感染した線維芽細胞におけるUV誘発DNA損傷の修復を調べました。彗星アッセイは、修復が開始されたことを示したが、感染した細胞では完成しなかった。シクロブタンピリミジン二量体（CPD）の免疫蛍光局在の定量分析により、24時間の修復後、CPDはウイルスDNAで大幅に減少したが、感染した宿主DNAでは有意に変化していないことが明らかになりました。CPD修復をさらに定量化するために、ホストとウイルスのDNAを同時に視覚化できる新しいデュアルカラー南部プロトコルを開発しました。この南部の方法論とCPD特異的T4エンドヌクレアーゼVアルカリアガロースアッセイを組み合わせて、付加物の修復を定量化すると、ウイルスDNAからのCPDの効率的な修復が見つかりましたが、宿主細胞DNAではなく見つかりました。我々のデータは、HCMV感染細胞でNERが機能し、宿主のゲノムの不利益にウイルスゲノムをほぼ排他的に修復することを確認しています。

Many viruses subvert the host cell's ability to mount and complete various DNA damage responses (DDRs) after infection. HCMV infection of permissive fibroblasts activates host DDRs at the time of viral deposition and during replication, but the DDRs remain uncompleted without arrest or apoptosis. We believe this was in part due to partitioning of the damage response and double strand break repair components. After extraction of soluble proteins, the localization of these components fell into three groups: specifically associated with the viral replication centers (RCs), diffused throughout the nucleoplasm and excluded from the RCs. Others have shown that cells are incapable of processing exogenously introduced damage after infection. We hypothesized that the inability of the cells to process damage might be due to the differential association of repair components within the RCs and, in turn, potentially preferential repair of the viral genome and compromised repair of the host genome. To test this hypothesis we used multiple strategies to examine repair of UV-induced DNA damage in mock and virus-infected fibroblasts. Comet assays indicated that repair was initiated, but was not completed in infected cells. Quantitative analysis of immunofluorescent localization of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) revealed that after 24 h of repair, CPDs were significantly reduced in viral DNA, but not significantly changed in the infected host DNA. To further quantitate CPD repair, we developed a novel dual-color Southern protocol allowing visualization of host and viral DNA simultaneously. Combining this Southern methodology with a CPD-specific T4 endonuclease V alkaline agarose assay to quantitate repair of adducts, we found efficient repair of CPDs from the viral DNA but not host cellular DNA. Our data confirm that NER functions in HCMV-infected cells and almost exclusively repairs the viral genome to the detriment of the host's genome.