アブジジコリンブロックヌクレオチド除去修復を測定するための修正彗星アッセイに関するさらなる調査

彗星アッセイは、さまざまなタイプのDNA損傷の修復を測定するためにますます使用されています。経路特異的DNA病変の除去により、特定のDNA修復経路の修復能力を決定するために、標準プロトコルの修正が導入されています。最近、DNAポリメラーゼ阻害剤aphidicolinin菌の存在下または非存在下でベンゾ[A]ピレンジオールエポキシド（BPDE）を含む末梢血単核核酸細胞のin vitroチャレンジの後にDNA鎖切断を定量化することにより、ヌクレオチド切除修復（NER）の細胞表現型アッセイ。（APC）が開発されました（Vande Loock、K.、Decordier、I.、Ciardelli、R.、Haumont、D。and Kirsch-Volders、M。（2010）DNAの切開と修復能力を測定するアブジコリンヌクレオチド切除修復アッセイ。変異誘発、25、25-32）。個々の修復能力（RC）は、APCの存在下でBPDEによって誘発されるDNA損傷の量として、BPDEおよびAPCのみによって誘導される損傷を差し引いたものとして定義されました。この値は、主にNER酵素の切開容量を反映する必要があります。このアプローチに続いて、繰り返し実験で9つのドナーの培養された隔離された末梢血単核細胞のRCを調査しました。また、これらのドナーからの末梢全血培養で同じ実験を行いました。我々の結果は、単離された単核細胞のRCと同じドナーからの全血の間のかなりの個人間および個人間変動と実質的な違いを示しています。さらに、刺激されていない血液のRCは、刺激された血液の修復能力と有意な違いはありませんでしたが、個人間変動もかなり示されました。全体として、我々の結果は、このアッセイが人間のバイオモニタリング研究で確実に使用できる前に、このアッセイの標準化と検証がまだ必要であることを示唆しています。

The comet assay is increasingly used to measure the repair of various types of DNA damage. Modifications of the standard protocol have been introduced to determine the repair capacity of specific DNA repair pathways by the removal of pathway-specific DNA lesions. Recently, a cellular phenotype assay for nucleotide excision repair (NER) by quantifying the DNA strand breaks after in vitro challenge of peripheral blood mononucleated cells with benzo[a]pyrene diol epoxide (BPDE) in the presence or absence of the DNA polymerase inhibitor aphidicolin (APC) was developed (Vande Loock, K., Decordier, I., Ciardelli, R., Haumont, D. and Kirsch-Volders, M. (2010) An aphidicolin-block nucleotide excision repair assay measuring DNA incision and repair capacity. Mutagenesis, 25, 25-32). Individual repair capacity (RC) was defined as the amount of DNA damage induced by BPDE in the presence of APC minus the damage induced by BPDE and APC alone. This value should mainly reflect the incision capacity of the NER enzymes. Following this approach, we investigated the RC of cultured isolated peripheral blood mononuclear cells of nine donors in repeated experiments. We also performed the same experiments with peripheral whole blood cultures from these donors. Our results indicated considerable intra- and inter-individual variability and substantial differences between the RC of isolated mononuclear cells and whole blood from the same donor. Furthermore, the RC of unstimulated blood did not differ significantly from the repair capacity of stimulated blood but also showed considerable inter-individual variability. Altogether, our results suggest that there is still need for standardisation and validation of this assay before it can be reliably used in human biomonitoring studies.