ヒトCD28を標的とするモノクローナル抗体のアンタゴニスト特性：原子価と重鎖定数ドメインの役割

CD28を標的とする拮抗薬抗体は、CD80/86拮抗薬の使用に代わるものとして提案されており、自己免疫と移植におけるT細胞応答を調節しています。利点は、免疫応答の制御および調節T細胞の機能に重要なCTLA-4およびPD-L1とのCD80の相互作用に依存する共阻害信号を妨げることなく、CD28を介した共刺激シグナルの遮断です。抗CD28抗体は、CD28自体を同時に刺激することなく、CD80/86リガンドへのアクセスを妨げない場合にのみ、候補拮抗薬です。これは、受容体多量化に依存すると考えられているプロセスです。この研究では、T細胞の活性化に対する潜在的に拮抗薬抗体抗ヒトCD28抗体のさまざまな形式の影響を評価しました。特に、Valencyの役割とFCドメインの存在を調べました。これは、FC受容体を発現するアクセサリー細胞の直接または存在下で受容体多量化に影響を与える可能性のある2つの成分を調べました。モノベリント（FAB '、SCFV）、ダイバル（FAB'2）、モノベント-FC（FV-FC）、およびダイバル-FC（IGG）形式の中で、単独の形式のみが、誘導CD28多量化の一貫した欠如と関連する活性化の存在しないことを示しました。T細胞刺激アッセイにおけるホスホイノシトール-3-キナーゼ、および透明な拮抗薬特性。対照的に、二価抗体はアゴニスト特性を示し、それがFCに依存しない方法で細胞増殖とサイトカイン放出をもたらした。ポリエチレングリコール、α-1アンチトリプシン、またはFCドメインとの一価抗体の共役は、拮抗薬特性を変更することなく、in vivoの半減期を大幅に拡張しました。結論として、これらのデータは、抗CD28モノクローナル抗体の拮抗活性を維持するために一価が必須であることを示しています。

Antagonist antibodies targeting CD28 have been proposed as an alternative to the use of CD80/86 antagonists to modulate T cell responses in autoimmunity and transplantation. Advantages would be the blockade of CD28-mediated co-stimulatory signals without impeding the co-inhibitory signals dependent on CD80 interactions with CTLA-4 and PD-L1 that are important for the control of immune responses and for the function of regulatory T cells. Anti-CD28 antibodies are candidate antagonists only if they prevent access to the CD80/86 ligands without simultaneously stimulating CD28 itself, a process that is believed to depend on receptor multimerization. In this study, we evaluated the impact of different formats of a potentially antagonist anti-human CD28 antibody on T cell activation. In particular, we examined the role of valency and of the presence of an Fc domain, two components that might affect receptor multimerization either directly or in the presence of accessory cells expressing Fc receptors. Among monovalent (Fab', scFv), divalent (Fab'2), monovalent-Fc (Fv-Fc) and divalent-Fc (IgG) formats, only the monovalent formats showed consistent absence of induced CD28 multimerization and absence of associated activation of phosphoinositol-3-kinase, and clear antagonist properties in T cell stimulation assays. In contrast, divalent antibodies showed agonist properties that resulted in cell proliferation and cytokine release in an Fc-independent manner. Conjugation of monovalent antibodies with polyethylene glycol, α-1-antitrypsin or an Fc domain significantly extended their in vivo half-life without modifying their antagonist properties. In conclusion, these data indicate that monovalency is mandatory for maintaining the antagonistic activity of anti-CD28 monoclonal antibodies.