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骨髄単核細胞（BMNC）は再生医療で広く使用されていますが、最近のデータは、一般的に使用されるficollパク密度勾配遠心分離（DGC）によるBMNCの分離が有意な細胞喪失を引き起こし、グラフト機能に影響を与えることを示唆しています。この研究の目的は、動物研究で、調整されたパーコールDGCや多核細胞（PMNS）の免疫磁気分離などの代替分離方法と比較して、Ficoll-Paque DGCがBMNCの収量と組成に影響するかどうか、およびどのように影響するかを判断することでした。各分離手順は、フィコールパークDGCの後に最大であり、調整されたパーコールDGC後の中程度、少なくとも免疫磁気PMN枯渇の後に最大であったBMNCの大幅な損失によって混同されました（51.5±2.3および72.3±6.7％回復の総BMNCの回収率は51.5±2.3および72.3±6.7％回復溶解した骨髄）。興味深いことに、BMNCサブポピュレーションの割合は、分離プロトコルとは無関係に対称BMNC損失を示す溶解した骨髄の割合に似ていました。顆粒球マクロファージ（CFU-GM）のコロニー形成ユニットによって決定される造血幹細胞（HSC）含有量は、Percoll DGCおよび免疫磁気PMNの枯渇と比較して、FicollパークDGC後に大幅に減少しました。最後に、概念実証研究では、新鮮な人間の骨髄吸引剤に免疫脱毛によるBMNC分離のプロトコルを正常に適用しました。我々の発見は、前臨床研究と臨床研究の両方でBMNCを分離する一般的な方法は、ficollパークDGCを適応したパーコールDGCに置き換えるか、特にPMNSの免疫包装によって大幅に改善できることを示しています。
骨髄単核細胞（BMNC）は再生医療で広く使用されていますが、最近のデータは、一般的に使用されるficollパク密度勾配遠心分離（DGC）によるBMNCの分離が有意な細胞喪失を引き起こし、グラフト機能に影響を与えることを示唆しています。この研究の目的は、動物研究で、調整されたパーコールDGCや多核細胞（PMNS）の免疫磁気分離などの代替分離方法と比較して、Ficoll-Paque DGCがBMNCの収量と組成に影響するかどうか、およびどのように影響するかを判断することでした。各分離手順は、フィコールパークDGCの後に最大であり、調整されたパーコールDGC後の中程度、少なくとも免疫磁気PMN枯渇の後に最大であったBMNCの大幅な損失によって混同されました（51.5±2.3および72.3±6.7％回復の総BMNCの回収率は51.5±2.3および72.3±6.7％回復溶解した骨髄）。興味深いことに、BMNCサブポピュレーションの割合は、分離プロトコルとは無関係に対称BMNC損失を示す溶解した骨髄の割合に似ていました。顆粒球マクロファージ（CFU-GM）のコロニー形成ユニットによって決定される造血幹細胞（HSC）含有量は、Percoll DGCおよび免疫磁気PMNの枯渇と比較して、FicollパークDGC後に大幅に減少しました。最後に、概念実証研究では、新鮮な人間の骨髄吸引剤に免疫脱毛によるBMNC分離のプロトコルを正常に適用しました。我々の発見は、前臨床研究と臨床研究の両方でBMNCを分離する一般的な方法は、ficollパークDGCを適応したパーコールDGCに置き換えるか、特にPMNSの免疫包装によって大幅に改善できることを示しています。
Bone marrow mononuclear cells (BMNCs) are widely used in regenerative medicine, but recent data suggests that the isolation of BMNCs by commonly used Ficoll-Paque density gradient centrifugation (DGC) causes significant cell loss and influences graft function. The objective of this study was to determine in an animal study whether and how Ficoll-Paque DGC affects the yield and composition of BMNCs compared to alternative isolation methods such as adjusted Percoll DGC or immunomagnetic separation of polymorphonuclear cells (PMNs). Each isolation procedure was confounded by a significant loss of BMNCs that was maximal after Ficoll-Paque DGC, moderate after adjusted Percoll DGC and least after immunomagnetic PMN depletion (25.6±5.8%, 51.5±2.3 and 72.3±6.7% recovery of total BMNCs in lysed bone marrow). Interestingly, proportions of BMNC subpopulations resembled those of lysed bone marrow indicating symmetric BMNC loss independent from the isolation protocol. Hematopoietic stem cell (HSC) content, determined by colony-forming units for granulocytes-macrophages (CFU-GM), was significantly reduced after Ficoll-Paque DGC compared to Percoll DGC and immunomagnetic PMN depletion. Finally, in a proof-of-concept study, we successfully applied the protocol for BMNC isolation by immunodepletion to fresh human bone marrow aspirates. Our findings indicate that the common method to isolate BMNCs in both preclinical and clinical research can be considerably improved by replacing Ficoll-Paque DGC with adapted Percoll DGC, or particularly by immunodepletion of PMNs.
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