一次ヒトB細胞における効率的なレンチウイルス形質導入と導入遺伝子発現

原発性ヒトB細胞は、遺伝子療法用途の魅力的な標的ですが、多くの異なるエンベロープの擬似型をテストしたにもかかわらず、レンチウイルスベクター（LVV）による形質導入に対して比較的耐性があることがわかっています。さらに、一次ヒトB細胞での低い導入遺伝子発現は、この標的細胞にLVVの使用を妨げています。原発性ヒトB細胞のギボン - 皮膚白血病ウイルス（GALV）ENVと型のLVVSの形質導入の可能性を調査しました。最適化された形質導入速度と感染の多様性を確立することにより、CD40L活性化B細胞で50％以上の形質導入効率を定期的に得ることができました。注目すべきことに、Galv-Pseudoped LVVSを使用することで、はしかウイルス糖タンパク質と仮名型とともに直接比較して、導入された活性化B細胞の10倍以上の収率を達成できました。形質導入された原発性B細胞の表現型は、長寿命の表現型である記憶B細胞の大部分を明らかにしました。これは、耐久性のある治療介入に適していると推定されます。最後に、ヒト免疫グロブリン重鎖のエンハンサー（Eμ）とマトリックス/足場攻撃領域（MARS）と脾臓の焦点形成ウイルス（SFFV）のプロモーターを組み合わせることにより、B細胞に特に適した新しいLVVを生成することを目的としたトランスジェネシス。最適化されたベクターは、さまざまなB細胞株、さらに重要なことに、一次ヒトB細胞（平均因子3）で有意に高い導入遺伝子発現を促進したことを示します。要約すると、一次ヒトB細胞の効率的なレンチウイルス形質導入のための新しいプロトコルを確立し、特定のベクター修飾によりB細胞の導入遺伝子発現を改善しました。

Primary human B cells are an attractive target for gene-therapeutic applications, but have been found to be relatively resistant toward transduction with lentiviral vectors (LVVs), even though a number of different envelope pseudotypes were tested. Moreover, low transgene expression in primary human B cells has impeded the use of LVVs for this target cell. We investigated the transduction potential of gibbon-ape leukemia virus (GALV) Env-pseudotyped LVVs for primary human B cells. By establishing optimized transduction kinetics and multiplicities of infection, we were able to regularly obtain transduction efficiencies of more than 50% in CD40L-activated B cells. Noteworthy, with the use of GALV-pseudotyped LVVs we could achieve a more than 10-fold higher yield of transduced activated B cells in direct comparison with LVVs pseudotyped with measles virus glycoproteins. Phenotyping of transduced primary B cells revealed a majority of memory B cells, a long-lived phenotype, presumed to be well suited for enduring therapeutic interventions. Finally, by combining the enhancer (Eμ) and the matrix/scaffold-attachment regions (MARs) of the human immunoglobulin heavy chain with the promoter of spleen focus-forming virus (SFFV) we aimed at generating a novel LVV particularly suitable for B cell transgenesis. We show that the optimized vector facilitated significantly higher transgene expression in various B cell lines and, more importantly, primary human B cells (mean factor of three). In summary, we have established a novel protocol for the efficient lentiviral transduction of primary human B cells and have improved transgene expression in B cells by a specific vector modification.