生物学的サンプルにおけるヘロイン、6モノアセチルモルフィン、およびモルヒネの安定性と、ラットの薬物動態サンプルの分析を遅らせるためのLC-MSアッセイの検証

ヘロインの6モノアセチルモルフィン（6-mam）への分解、およびモルヒネは、in vivoおよびin vitroで急速に発生します。ヘロインの速度と6 mamの分解は、生物学的サンプルの種類と、貯蔵の期間と条件に依存します。ラットの薬物動態研究のために収集されたサンプルでヘロインとその代謝産物を測定するための条件を最適化するために、4つの生物学的マトリックスのヘロイン、6-mam、およびモルヒネの分解の時間経過を調査しました：ラット脳ホモジネート、ウシ血清、およびさまざまな条件下でのヒト血漿。分析物濃度はLC-MSによって測定されました。目標は、サンプルの収集と分析のスケジューリングに最大限の柔軟性を可能にする条件を特定し、血液および組織サンプルにおけるヘロインの安定性に関するより多くの情報を得ることでした。氷濃度の溶媒、フッ化ナトリウム（NAF）、および低いpH（3.0）を備えた固相抽出方法は、サンプルの安定性を維持しました。品質管理は、目標値の94.0-105％以内でした。変動性は、ヘロインで5-200 ng/mlの範囲内のすべての分析物で4.0〜8.9％、6 mamで5-1000 ng/ml、モルヒネでは10-200 ng/mlでした。6 mamへのヘロインの分解は、ラット全血の方が血漿よりも速く、ラットの脳ホモジネートよりもラット血漿の方が速くなりました。処理中に安定性の向上を通じてNAFを4 mg/mlに維持します。全血に追加されるNAF濃度が高いほど溶血が原因でした。固相抽出を通じて処理され、80°Cの乾燥ペレットとして保存されたサンプルは、ヘロインの最も安定した環境を構成し、抽出前または抽出後に溶液中のサンプルの貯蔵よりも優れていました。それにもかかわらず、抽出後のヘロインと6 mamレベルは、これらの条件下でラット血漿で1週間で6.7-8.3％、ウシ血清またはヒト血漿では1-4.7％未満減少しました。

Degradation of heroin to 6-monoacetylmorphine (6-MAM) and then morphine happens rapidly in vivo and in vitro. The rates of heroin and 6-MAM degradation depend on the type of biological samples, and the duration and conditions of storage. In order to optimize conditions for measuring heroin and its metabolites in samples collected for pharmacokinetic studies in rats, we investigated the time course of degradation of heroin, 6-MAM, and morphine in four biological matrices: rat blood, rat brain homogenate, bovine serum, and human plasma under various conditions. Analyte concentrations were measured by LC-MS. The goal was to identify conditions that allow maximum flexibility in scheduling sample collection and analysis, as well as gain more information on the stability of heroin in blood and tissue samples. A solid-phase extraction method with ice-cold solvents, sodium fluoride (NaF) and a low pH (3.0) maintained sample stability. Quality controls were within 94.0-105% of the target value. Variability was 4.0-8.9% for all analytes within the range of 5-200 ng/mL for heroin, 5-1000 ng/mL for 6-MAM, and 10-200 ng/mL for morphine. Heroin degradation to 6-MAM was faster in rat whole blood than in plasma, and faster in rat plasma than in rat brain homogenate. Maintaining NaF at 4 mg/mL throughout processing enhanced stability; higher NaF concentrations added to whole blood caused hemolysis. Samples processed through solid phase extraction and stored as dried pellets at 80°C constituted the most stable environment for heroin, and was superior to the storing of samples in solution prior to or after extraction. Nevertheless, post-extraction heroin and 6-MAM levels declined by 6.7-8.3% over one week in rat plasma under these conditions, and by <1-4.7% in bovine serum or human plasma.