ヒト角膜と辺角内のEPH受容体とエフリン発現の評価

EPH受容体チロシンキナーゼとそのリガンドであるエフリンは、複数の臓器の発達と維持を調節しますが、角膜内での潜在的な役割についてはほとんど知られていません。この研究の目的は、核骨幹細胞のニッチを含むヒト角膜内のEph/ephrin発現の徹底的な調査を実施することでした。当初、角膜と縁のEPH受容体とエフリンの空間的分布を決定するために、免疫組織化学をヒトのドナーの眼で実施しました。（1）不死化ヒト角膜内皮（B4G12）または角膜上皮（HCE-T）細胞株、および（2）カダベリック眼組織の角膜リムバスから確立された上皮または間質細胞の原発性培養物におけるEph/ephrin遺伝子発現のパターンは、次に、逆転写（RT）PCRによって評価されます。原発性培養物の副皮細胞または間質細胞も、免疫蛍光によるEph/ephrin反応性の証拠について評価されました。Ephrina1およびEphb4の免疫反応性は、ドナーの眼の角膜内皮で検出されました。EPHB4は、核と角膜上皮および角膜角膜の間質に位置する細胞でも一貫して検出されました。複数のEph/エフリン遺伝子の発現は、不死化角膜上皮および内皮細胞株で検出されました。Eph/ephrin遺伝子発現の証拠は、RT-PCRと免疫蛍光の両方を使用して、ヒト結核間質（Ephb4、B6; Ephrina5）および上皮細胞（Epha1、A2; Ephrina5、B2）の原発性培養でも実証されました。ヒト角膜と辺縁内のEPH受容体とエフリンの発現は、以前に評価されたよりもはるかに広く、通常の角膜建築の維持におけるこれらの分子の複数の潜在的な役割を示唆しています。

Eph receptor tyrosine kinases and their ligands, the ephrins, regulate the development and maintenance of multiple organs but little is known about their potential role within the cornea. The purpose of this study was to perform a thorough investigation of Eph/ephrin expression within the human cornea including the limbal stem cell niche. Initially, immunohistochemistry was performed on human donor eyes to determine the spatial distribution of Eph receptors and ephrins in the cornea and limbus. Patterns of Eph/ephrin gene expression in (1) immortalised human corneal endothelial (B4G12) or corneal epithelial (HCE-T) cell lines, and (2) primary cultures of epithelial or stromal cells established from the corneal limbus of cadaveric eye tissue were then assessed by reverse transcription (RT) PCR. Limbal epithelial or stromal cells from primary cultures were also assessed for evidence of Eph/ephrin-reactivity by immunofluorescence. Immunoreactivity for ephrinA1 and EphB4 was detected in the corneal endothelium of donor eyes. EphB4 was also consistently detected in the limbal and corneal epithelium and in cells located in the stroma of the peripheral cornea. Expression of multiple Eph/ephrin genes was detected in immortalised corneal epithelial and endothelial cell lines. Evidence of Eph/ephrin gene expression was also demonstrated in primary cultures of human limbal stromal (EphB4, B6; ephrinA5) and epithelial cells (EphA1, A2; ephrinA5, B2) using both RT-PCR and immunofluorescence. The expression of Eph receptors and ephrins within the human cornea and limbus is much wider than previously appreciated and suggests multiple potential roles for these molecules in the maintenance of normal corneal architecture.