Huh-7およびVero細胞のトランスフェクション方法の最適化：比較研究

効率的なトランスフェクションプロトコルの可用性は、すべての細胞型に対して実験的に達成される哺乳類細胞の遺伝子導入研究の成功における最初の決定要因です。ここでは、HUH-7およびVERO細胞のエレクトロポレーションと化学法によるトランスフェクション条件の最適化に関する比較研究のデータを提供します。さまざまな細胞合流、DNA/試薬比、および総トランスフェクションボリュームがJetPEIとLipofectamine 2000を含む2つの化学試薬に対して最適化されました。さらに、電界強度と脈拍数の影響を調査して、電気物ョウ効率を改善しました。PEGFP-N1ベクターによる細胞のトランスフェクションとFACSおよび蛍光顕微鏡分析によるGFPの発現の追跡は、トランスフェクション効率を評価するための採用方法でした。最適化されたエレクトロポレーションプロトコルは、HUH-7およびVERO細胞のトランスフェクションのそれぞれ63.73 +/- 2.36および73.9 +/- 1.6％を生成しましたが、JetPEIによるトランスフェクションの最大レベルはそれぞれ14.2 +/- 0.69および28 +/- 1.11％でした。同じセル。細胞のトランスフェクションの寒さは、HUH-7細胞の電気伝達効率を改善しませんでした。化学ベースの試薬と比較して、エレクトロポレーションは両方の細胞株に優れたレベルのトランスフェクションを示しました。提示されたプロトコルは、これら2つの細胞株の高いトランスフェクション効率を必要とするほとんどの実験アプリケーションを満たす必要があります。

Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electroporation and chemical methods for Huh-7 and Vero cells. Different cell confluencies, DNA/reagent ratios and total transfection volumes were optimized for two chemical reagents including jetPEI and Lipofectamine 2000. Besides, the effects of electric field strength and pulse length were investigated to improve electroporation efficiency. Transfection of cells by pEGFP-N1 vector and tracking the expression of GFP by FACS and Fluorescence Microscopy analysis were the employed methods to evaluate transfection efficiencies. Optimized electroporation protocols yielded 63.73 +/- 2.36 and 73.9 +/- 1.6% of transfection in Huh-7 and Vero cells respectively, while maximum achieved level of transfection by jetPEI was respectively 14.2 +/- 0.69 and 28 +/- 1.11% for the same cells. Post transfectional chilling of the cells did not improve electrotransfection efficiency of Huh-7 cells. Compared to chemical based reagents, electroporation showed the superior levels of transfection in both cell lines. The presented protocols should satisfy most of the experimental applications requiring high transfection efficiencies of these two cell lines.