プロテインキナーゼCは、原発性ヒトマクロファージからのアポリポタンパク質Eの小胞輸送と分泌を制御します

マクロファージ特異的アポリポタンパク質E（APOE）分泌は、アテローム性動脈硬化において重要な保護的役割を果たします。ただし、一次ヒト単球由来マクロファージ（HMDM）からのA​​poE分泌を調節する正確なシグナル伝達メカニズムは不明のままです。ここでは、HMDMSからの基底および刺激されたAPOE分泌の調節におけるプロテインキナーゼC（PKC）の役割を調査します。構造的に異なるPAN-PKC阻害剤（Calphostin C、RO-31-8220、GO6976）およびPKC阻害ペプチドによるHMDMの処理はすべて、APOE MRNAまたはAPOEタンパク質レベルに大きく影響することなくAPOE分泌を大幅に減少させました。PKC活性化因子12-ミリステート13-アセテート（PMA）はAPOE分泌を刺激し、PMA誘導およびアポアイ誘発APOE分泌の両方がPKC阻害剤によって阻害されました。APOE分泌のPKC調節は、ATP結合カセットトランスポーターABCA1とは無関係であることがわかりました。ライブセルイメージングは​​、PKC阻害剤が血漿膜へのApoEの小胞輸送を阻害することを実証しました。薬理学的またはペプチド阻害剤およびノックダウンの研究は、PKCΔ、-ε、-θ、または-ι/ζアイソフォームではなく、古典的なアイソフォームがPKCα/β/βをHMDMSからのAPOE分泌を調節することを示しています。ミリストイル化されたアラニンリッチプロテインキナーゼC基質（MARCKS）の活性は、これらの細胞のPKC活性の調節と相関があり、MARCKSの直接ペプチド阻害はAPOE分泌を阻害し、APOE分泌におけるPKCのダウンストリームエフェクターとしてMARCKを阻害しました。他の分泌タンパク質との比較は、PKCがマトリックスメタロプロテイナーゼ9およびキチナーゼ-3-様タンパク質の同様に調節された分泌を同様に調節したが、他のタンパク質の分泌に異なる影響を与えたことを示した。結論として、PKCは一次ヒトマクロファージからのAPOEの分泌を調節します。

Macrophage-specific apolipoprotein E (apoE) secretion plays an important protective role in atherosclerosis. However, the precise signaling mechanisms regulating apoE secretion from primary human monocyte-derived macrophages (HMDMs) remain unclear. Here we investigate the role of protein kinase C (PKC) in regulating basal and stimulated apoE secretion from HMDMs. Treatment of HMDMs with structurally distinct pan-PKC inhibitors (calphostin C, Ro-31-8220, Go6976) and a PKC inhibitory peptide all significantly decreased apoE secretion without significantly affecting apoE mRNA or apoE protein levels. The PKC activator phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulated apoE secretion, and both PMA-induced and apoAI-induced apoE secretion were inhibited by PKC inhibitors. PKC regulation of apoE secretion was found to be independent of the ATP binding cassette transporter ABCA1. Live cell imaging demonstrated that PKC inhibitors inhibited vesicular transport of apoE to the plasma membrane. Pharmacological or peptide inhibitor and knockdown studies indicate that classical isoforms PKCα/β and not PKCδ, -ε, -θ, or -ι/ζ isoforms regulate apoE secretion from HMDMs. The activity of myristoylated alanine-rich protein kinase C substrate (MARCKS) correlated with modulation of PKC activity in these cells, and direct peptide inhibition of MARCKS inhibited apoE secretion, implicating MARCKS as a downstream effector of PKC in apoE secretion. Comparison with other secreted proteins indicated that PKC similarly regulated secretion of matrix metalloproteinase 9 and chitinase-3-like-1 protein but differentially affected the secretion of other proteins. In conclusion, PKC regulates the secretion of apoE from primary human macrophages.