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この研究の目的は、開発されていない国で潜在的に使用可能なHBF決定の単純で費用対効果の高い方法を開発して、ヒドロキシ尿素治療に対する鎌状赤血球患者の反応を決定することでした。正常な成体血液(HBA)、臍帯血(HBF)、および50:50混合物(HBA+F)は、手順開発で使用される3つのサンプルタイプでした。通常の血液サンプルは研究チームから収集され、脱同意した臍帯血サンプルは、ミズーリ州セントルイスのグレンノン小児科研究所枢機inalによって提供されました。すべての血液サンプルのヘマトクリットは35%に標準化されました。この方法は、Kleihauer-Betke(K-B)テスト原理に基づいて、クエン酸塩溶液を使用してRBCからHBAを選択的に排出しましたが、HBFは細胞内のままであり、溶出物の分光光度吸収性が主要な結果尺度でした。395 nmの波長、30秒の遠心分離時間、6分間のインキュベーション時間、20ミクロールの血液量、および0.06 Mリン酸ナトリウムバッファー溶液中の0.07 Mクエン酸ナトリウムを使用して、手順が開発され、最適化されました。平均HBA吸光度が1.285(SD 0.069)、平均HBA+F吸光度が0.690(SD 0.050)、平均HBF吸光度0.035(SD 0.005)で、再現性が実証されました(n = 39)。また、直線性(R2 = 0.99)を示しました。HBF測定のこの単純で費用対効果の高い方法は、未発達の国でのヒドロキシ尿素治療に対する鎌状赤血球患者の反応を決定するための基礎としての可能性を示しています。
この研究の目的は、開発されていない国で潜在的に使用可能なHBF決定の単純で費用対効果の高い方法を開発して、ヒドロキシ尿素治療に対する鎌状赤血球患者の反応を決定することでした。正常な成体血液(HBA)、臍帯血(HBF)、および50:50混合物(HBA+F)は、手順開発で使用される3つのサンプルタイプでした。通常の血液サンプルは研究チームから収集され、脱同意した臍帯血サンプルは、ミズーリ州セントルイスのグレンノン小児科研究所枢機inalによって提供されました。すべての血液サンプルのヘマトクリットは35%に標準化されました。この方法は、Kleihauer-Betke(K-B)テスト原理に基づいて、クエン酸塩溶液を使用してRBCからHBAを選択的に排出しましたが、HBFは細胞内のままであり、溶出物の分光光度吸収性が主要な結果尺度でした。395 nmの波長、30秒の遠心分離時間、6分間のインキュベーション時間、20ミクロールの血液量、および0.06 Mリン酸ナトリウムバッファー溶液中の0.07 Mクエン酸ナトリウムを使用して、手順が開発され、最適化されました。平均HBA吸光度が1.285(SD 0.069)、平均HBA+F吸光度が0.690(SD 0.050)、平均HBF吸光度0.035(SD 0.005)で、再現性が実証されました(n = 39)。また、直線性(R2 = 0.99)を示しました。HBF測定のこの単純で費用対効果の高い方法は、未発達の国でのヒドロキシ尿素治療に対する鎌状赤血球患者の反応を決定するための基礎としての可能性を示しています。
The objective of this study was to develop a simple, cost-effective method of HbF determination potentially useable in underdeveloped countries to determine sickle cell patient response to hydroxyurea treatment. Normal adult blood (HbA), cord blood (HbF), and a 50:50 mixture (HbA+F) were the three sample types used in procedure development. Normal blood samples were collected from the research team, and de-identified cord blood samples were provided by Cardinal Glennon Pediatric Research Institute, St. Louis, MO. The hematocrit of all blood samples was standardized to 35%. The method, based on the Kleihauer-Betke (K-B) test principle, used a citrate solution to selectively elute HbA from RBCs while HbF remained intracellular, and spectrophotometric absorbance of the eluate was the primary outcome measure. A procedure was developed and optimized utilizing a 395 nm wavelength, 30 sec centrifugation time, 6 min incubation time, 20 microL blood volume, and 0.07 M sodium citrate in a 0.06 M sodium phosphate buffer solution. Reproducibility was demonstrated (N = 39) with a mean HbA absorbance of 1.285 (SD 0.069), mean HbA+F absorbance of 0.690 (SD 0.050), and mean HbF absorbance of 0.035 (SD 0.005), also exhibiting linearity (r2 = 0.99). This simple, cost-effective method of HbF determination shows potential as a basis for determining sickle cell patient response to hydroxyurea treatment in underdeveloped countries.
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